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Anais do XVII Encontro de Iniciação Científica – ISSN 1982-0178
Anais do II Encontro de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação – ISSN 2237-0420
25 e 26 de setembro de 2012
AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE REGENERADORA DE IMPLANTES IN-
TRAÓSSEO DE GUTA-PERCHA REVESTIDO POR MICRODILUI-
ÇÃO DINAMIZADA DE Arnica montana
Thais Batista Fernandes
Faculdade de Ciências Farmacêuticas
Centro de Ciências da Vida
thais.bf@puccampinas.edu.br
Pedro Paulo Barros
Grupo de Pesquisa ou Programa do Orientador
Centro de Ciências da Vida
barrospp@puc-campinas.edu.br
Resumo: Este trabalho avaliou in vivo, a resposta
tecidual óssea após realização de implante, em falha
óssea tibial, de um tipo de material biocompatível, o
guta-percha, revestido com solução microdiluida e
dinamizada de Arnica Montana. Foram utilizados 16
ratos albinos da linhagem Wistar divididos em 4 grupos.
Os corpos de prova do material, cones de gutapercha
revestidos com microdiluição dinamizada de
Arnica montana, permaneceram implantados por 24
horas, 1 semana, 2 semanas e 4 semanas em falha
óssea na tíbia da pata esquerda traseira e no tecido
subcutâneo da região dorsal. Lâminas histológicas
dos espécimes do tecido ósseo e subcutâneo, contendo
os corpos de prova do material, foram coradas
em Hematoxilina-Eosina, fotografados e analisadas
histomorfometricamente. A resposta tecidual foi analisada
levando-se em consideração a presença e
intensidade de inflamação e de componentes do infiltrado
celular inflamatório, fibrócitos e fibroblastos,
associadas ao processo cicatricial e de regeneração
óssea. Conclusão: O material implantado não interferiu
significativamente no processo de ossificação da
falha óssea. Os resultados obtidos mostram que a
microdiluição dinamizada de Arnica montana não
desencadeou processo inflamatório, não havendo
alterações no perfil normal de cicatrização, sugerindo
que o material também não interfira neste processo
regenerativo.
Palavras-chave: Homeopatia, Implantes, Arnica
montana, ratos.
Área do Conhecimento: Saúde (400.00.00-1) - Materiais
Odontológicos (4.02.09.00-8).
1. INTRODUÇÃO
Em fraturas de ossos compactos, onde há perda
substancial de tecido ósseo, a reconstituição da peça
óssea, pode ser realizada com diferentes materiais
para enxerto, autógenos ou não, com o intuito de
recuperar o osso perdido e tornar possível sua reabilitação.
Nestes casos, o enxerto ósseo é fixado na
sua nova posição e somente as células osteogênicas
do periósteo, endósteo e osteócitos próximos às superfícies
banhadas pelo líquido tissular, possuem
condições favoráveis de sobrevivência [1]. A aquisição
de enxerto ósseo autógeno traz riscos ao paciente,
incluindo incisão cirúrgica adicional, aumento
da morbidade pós-operatória, debilitação do local
doador e quantidade disponível insatisfatória de enxerto
autógeno, como nas crianças e adultos submetidos
a procedimentos operatórios anteriores [2,3].
Para manter ou auxiliar a capacidade regenerativa
inerente, de forma relativamente inalterada, utilizamse
substitutos ósseos [4] osteoindutores e osteocondutores.
Uma das vantagens desses substitutos ósseos
é não produzir trauma adicional ao paciente ou
qualquer outro tipo de risco conforme citado. O material
osteoindutor estimula as células indiferenciadas
da ferida a se converterem fenotipicamente em células
osteoprogenitoras, e conseqüentemente osteoblastos,
responsáveis pela neoformação óssea [5].
Os osteocondutores não têm capacidade de induzir a
citodiferenciação de osteoblastos, mas podem preencher
a falha, orientando as novas células originadas
por proliferação de células osteoprogenitoras
[5,6].
Assim, atualmente, a regeneração tecidual guiada
(RTG) tem apresentado bons resultados, especificamente
a regeneração óssea guiada (ROG), que foi
uma seqüência lógica e natural dos princípios criados
para a RTG. O princípio da ROG baseia-se na
função desempenhada pelo periósteo no organismo,
ou seja, isolar o tecido ósseo do tecido adjacente,
criando desta forma condições ideais para a neoformação
óssea [7]. Este autor, estudando a capacidade
osteogênica do periósteo em ratos adultos, observou
que se houvesse deslocamento ou fosse excisionado,
perderia esta característica. Em 1971 foi
realizado novo estudo pelo mesmo autor em ratos
jovens, sendo verificado que o deslocamento do periósteo
não levava à perda da capacidade osteogêni-

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ca, o que foi explicado pela melhor atividade osteoblástica
dos animais jovens.
Devido às diferenças de velocidade de divisão e diferenciação
celulares dos diferentes tecidos, o tecido
conjuntivo frouxo e o tecido epitelial competem com
vantagem com o tecido ósseo ou outros, como o ligamento
periodontal, por exemplo, e impedem a regeneração
desses últimos [8,9,10,11,12] e assim a
ROG favorece significativamente a neoformação óssea
na consolidação de falhas e fraturas. Evidentemente,
o processo de ossificação depende também
da ocorrência de mineralização efetiva, e para esta
existem requisitos básicos, como uma concentração
adequada de íons cálcio e fosfato, presença de matriz
a ser calcificada, agentes de nucleação e controle
de agentes reguladores (promotores e inibidores).
Adicionalmente, a formação óssea depende de dois
pré requisitos indispensáveis: suporte sangüíneo
amplo e suporte mecânico [13] sendo que o segundo
pode ser dado pelos diversos materiais utilizados na
ROG.
Os biomateriais inorgânicos são compostos alternativos
ao uso de enxertos ósseos autógenos por serem
produzidos com propriedades potencialmente semelhantes
às do tecido receptor e quando usados em
defeitos de ossos longos constituem-se um obstáculo
à invasão do tecido mole vizinho, permitindo crescimento
de tecido ósseo diretamente sobre suas trabéculas
porosas e acelulares [14,15]. Estes representam
uma boa alternativa para utilização na ROG.
DAHLIN et al. [16] inseriram implantes na tíbia de
coelhos, e testaram a técnica da ROG, para gerar
osso em torno de implantes de titânio, em que isolando-se
o defeito ósseo dos tecidos moles adjacentes,
ocorria uma formação completa e seletiva de
osso. As áreas dos implantes cobertas pela membrana
mostraram um crescimento de osso novo significante,
indicando que a técnica da membrana seria
um método cirúrgico reconstrutivo que poderia ser
aplicado para criar osso em volta das roscas expostas
dos implantes de titânio, em situação clínica.
Os materiais (barreiras físicas) utilizados para ROG
apresentam características diferentes de absorção,
ou seja, podem ser não-absorvíveis e absorvíveis.
As primeiras membranas não-absorvíveis comerciais
aprovadas para uso clínico foram feitas de politetrafluoroetileno
expandido (e-PTFE) e teflon poroso
[17,18,19]. Outras membranas não-absorvíveis também
foram estudadas, como membranas de politetrafluoroetileno
(PTFE) [20], silicone (Biobrane®)
[21] e celulose [22]. Estudos indicam um melhor preenchimento
dos defeitos obtidos com o uso de uma
membrana não-absorvível [20]. Devido as suas boas
características e aplicabilidade, membranas absorvíveis
com características similares às não-absorvíveis
foram então desenvolvidas: membranas de colágeno
[23,24], ácido poliláctico (Guidor®) [25], poliglactina
910 (Vicryl®) [26] e ácido poliláctico glicólico
(PLGA®) [27]. Elas são conhecidas clinicamente,
sobretudo devido ao fato de que uma segunda intervenção
cirúrgica seja desnecessária, pois se espera
que sejam completamente reabsorvidas em 12 meses
[28].
No caso específico de membranas não absorvíveis
como o Politetrafluoretileno Expandido (e-PTFE), sua
estrutura não permite a penetração de células sendo
um fator importante para o seu sucesso como barreira
física [13] Inúmeros estudos experimentais em
animais demonstraram que o material da membrana
é bioinerte e permite a integração tecidual sem complicação,
uma vez que se pode obter a cicatrização
submersa sem o contato direto à cavidade oral. Para
indicações periodontais o uso de membranas absorvíveis
pode ter a vantagem de se evitar um segundo
procedimento cirúrgico para a sua remoção. Entretanto,
o uso de membranas absorvíveis para indicações
implantares não oferece esta vantagem, uma
vez que os sítios cirúrgicos precisam ser reabertos
de qualquer forma, tanto para a conexão do abutment
(abordagem simultânea) quanto para colocação
do implante [13].
Além destes, outros materiais não tão convencionais
foram testados para utilização na regeneração óssea
guiada ou simplesmente com o objetivo de verificar
biocompatilidade e emprego como implante ósseo.
SASSIOTO e colaboradores [29] realizaram estudo
do reparo ósseo com matriz óssea bovina desvitalizada
e calcitonina em ratos verificando que uso de
calcitonina em defeitos preenchidos com matriz óssea
bovina desvitalizada estimula a neoformação
óssea com 7 e 14 dias de pós-operatório.
CIANI e colaboradores [30] desenvolveram estudo
utilizando mistura de proteínas morfogenéticas ósseas,
hidroxiapatita, osso inorgânico e colágeno, envolta
por membrana de pericárdio, no preenchimento
de defeito ósseo segmentar em coelhos e verificaram,
ao contrário do esperado, que a regeneração
óssea foi inibida nos defeitos segmentares tratados
com este biomaterial.
OLIVEIRA e colaboradores [31] estudando a biocompatibilidade
e uso da membrana fibrosa da casca
de ovo na regeneração óssea guiada, verificaram
que este material é biocompatível devido a ausência
de infiltrado linfoplasmocitário nos tecidos, funcionando
também como barreira, permitindo a produção
de osso, com utilidade na ROG.
Polímeros e materiais odontológicos foram testados
como implantes ósseos, sendo que o sistema polica-

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prolactona/NAFION®, proporção 70/30, demonstrou
ser uma estrutura de suporte temporário e na proporção
90/10 não favoreceu a migração e o crescimento
celular [32] Implantes ósseos de Mineral Trioxide
Aggregate [33] e subcutâneos de cones de Guta-percha
e Resilon [34] se mostraram biocompatíveis
nestes tecidos, sugerindo potencial utilização na
ROG, porém há necessidade de realização de testes
complementares.
Em meados do século XIX, segundo SOLER &
SHOCRON [35], Bowmann, em 1867, introduziu na
Endodontia a guta-percha, uma substância vegetal
extraída sob a forma de látex de árvores da família
das sapotáceas (Mimusops balata e Mimusops hiberi),
a qual tem sido aceita como o melhor material
para a obturação do sistema de canais radiculares.
Este material encontra-se disponível para o uso o-
dontológico em associação a outros componentes
numa proporção aproximada de 20% de gutapercha,
60 a 75% de óxido de zinco e os demais e-
lementos em proporções menores (1,5 a 15% aproximadamente).
A guta-percha apresenta-se sob duas
formas cristalinas distintas: α (alfa-cristalina) e β (beta-cristalina)
[36]. A guta-percha na forma alfacristalina
é quebradiça à temperatura ambiente, tornando-se,
quando aquecida, pegajosa, aderente e
com maior escoamento. Sua temperatura de fusão é
de 65°C. Já a forma beta-cristalina, disponível comercialmente,
na maioria dos casos, é estável e flexível
à temperatura ambiente. Quando aquecida, não
passa a apresentar adesividade e tem menor escoamento
do que a forma alfa. Sua temperatura de
fusão é de 56°C [37,38].
O uso de plantas com finalidade medicinal para fins
curativos e paliativos, data do período Paleolítico
[39]. O consumo de plantas medicinais in natura ou
devidamente preparadas vem apresentando um
crescimento considerável em diversos países. Essa
tendência pode ser explicada por diferentes fatores,
destacando-se entre eles o custo elevado e os efeitos
indesejáveis dos fármacos sintéticos, preferência
dos consumidores por “produtos naturais”, a certificação
científica das propriedades farmacológicas de
espécies vegetais, o desenvolvimento de novos métodos
analíticos realizados para um controle de qualidade,
o desenvolvimento de novas formas de preparação
e administração de produtos fitoterápicos,
um melhor conhecimento químico, farmacológico e
clínico das drogas vegetais e seus derivados [40].
Nesse sentido, existem fitoterápicos, como a Arnica
Montana, muito utilizados para fins curativos, e neste
caso em específico, a arnica se mostra bastante efetiva
no tratamento de traumatismos músculoesqueléticos
devido a suas propriedades cicatrizante,
antiinflamatória e regeneradora.
A Arnica Montana, pertence à família das Asteraceas,
sendo nativa das regiões montanhosas da Europa
central, como Alpes e Pireneus, além do sul da
Scandinávia se estende através dos estados da União
Soviética até a região da Sibéria [41]. É uma planta
vivaz pelos seus rizomas horizontais, de caules
herbáceos anuais, erectos, simples, com folhas basilares,
sésseis, em roseta e caulinares pouco numerosas,
mais lanceoladas e menores, peludogrânulosas
e flores em capítulos solitaries [42]. Na
terapêutica utilizam-se os rizomas e principalmente
os capítulos florais, constituindo a droga vegetal
quando secos, e esta se encontra inscrita em Farmacopéias
de vários países, inclusive nas três primeiras
edições da Farmacopéia Brasileira (Farmacopéia,
1926; 1959; 1977).
A arnica apresenta extratos com propriedades na
absorção de edemas, e cicatrização de feridas, propriedades
analgésicas e antinflamatória [43]. É utilizada
topicamente em contusões, inflamações [44],
ferimentos e hemorragias subcutâneas [45].
Os principais constituintes e substâncias ativas da
arnica são a inulina, taninos, resinas, ceras, mistura
de diversos ácidos como linoléicos, linolênico, mirístico
e palmítico, hidrocarbonetos parafínicos, ácidos
orgânicos (fórmico, angélico, málico, caféico e gálhico),
arnicina, arnidiol e sitosterina. Além desses foram
identificados por cromatografia isoquercitrina,
quercetol-3 glucogalacturônido, astragalina e eugenina.
O óleo essencial contém ésteres metílicos dos
ácidos fórmico, butírico valeriânico, láurico, palmítico,
acético e isobutírico e a dimetil-timo-hidroquinona.
Na flor foram também encontrados arnicina, arnisterina,
arnicaína (alcalóide), fitosterina, ácidos málico e
tânico [42,41].
TESKE E TRENTINE [46] afirmam que vários compostos
de Arnica montana apresentam atividade biológica:
os triterpenos são espasmolíticos e musculatura
lisa, sobretudo dos vasos que atuam na limitação
da resposta inflamatória tecidual. Os flavonóides
potencializam a ação dos terpenos, estabilizando a
membrana celular. As propriedades antiinflamatória
e analgésica da arnica se explicam pela diminuição
da atividade enzimática no processo inflamatório. O
fitocomplexo bloqueia a inflamação causada por
traumatismos, diminui a formação de exsudato e incrementa
a reabsorção e a ação de células responsáveis
pela destruição de fragmentos biológicos.
Além do grande emprego na Arnica Montana na fitoterapia,
que faz parte da concepção alopática, este
vegetal apresenta importante utilização na homeopatia,
sendo considerada um policresto (do grego,

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polys = muitos e khéstos = benéfico; e do latim polychrestus
= que tem muitas aplicações). Apesar de
sua ampla aplicação homeopática nos vários sistemas
orgânicos, assim como na fitoterapia, a arnica é
indicada especialmente para o tratamento para
traumatismos, fraturas, dores e hemorragias [47].
ALECU e colaboradores [48] realizaram estudo visando
verificar o efeito do medicamento homeopático
Arnica montana 7CH no traumatismo mecânico
em camundongos e verificaram que a Arnica montana
7CH, administrado por sonda imediatamente depois
da produção de traumatismo, apresentou efeito
estatisticamente significativo na redução do edema
traumático, assim como do tempo necessário para a
recuperação funcional do membro afetado em animais
de experimentação.
Estes mesmo autores [49] verificaram que o medicamento
homeopático de Arnica montana 7 CH e 30
CH apresentaram efeito estatisticamente significativo
no tempo de cicatrização de incisão cirúrgica em ratos.
Existem ainda relatos de avaliação clínica com arnica
(em medicamento homeopático) em inflamações
de origem odontológica. A arnica foi utilizada em pacientes
submetidos à remoção cirúrgica de terceiros
molares inferiores, iniciando o tratamento três dias
antes da cirurgia. Não houve edema em 90% dos
pacientes, devido à redução da permeabilidade capilar
resultando em diminuição do sangramento durante
a cirurgia [50]
A efetividade da homeopatia no processo reparação
ósseo já foi verificada anteriormente em experimento
realizado por ALMEIDA e colaboradores [51] em estudo
de reparação óssea em mandíbula de ratos
sem barreira mecânica, utilizando-se o medicamento
Plumbum metallicum 30 CH. Os resultados do trabalho
mostraram que esse medicamento favoreceu a
reparação dos defeitos ósseos.
2. OBJETIVO
Avaliar in vivo a atividade regeneradora do tecido
ósseo após realização de implante, em falha óssea
tibial, de um tipo de material biocompatível, o gutapercha,
revestido com solução microdiluida e dinamizada
de Arnica montana.
3. METODOLOGIA
3.1 Processo de revestimento da microdiluição
dinamizada nos cones de guta-percha
Em um vidro de relógio com 12 cm de diâmetro, adicionou-se
10 mL da microdiluição dinamizada de
Arnica montana, juntamente com 10 cones de gutapercha,
deixando em repouso por 15 minutos, em
temperatura ambiente.
3.2 Implantes
Foram utilizados 16 ratos albinos da linhagem Wistar
divididos em 4 grupos de acordo com o tempo de
permanência do material implantado: 24 horas, 1, 2 e
4 semanas.
Após pesagem dos animais, estes foram submetidos
à anestesia geral por solução de Cloridrato de Xylasina
(Virbaxyl ® 2%) + Ketamina (Francotar ® ), administrado
por via intramuscular na dose de 1,5 mL/Kg
de peso corporal. Posteriormente, os animais foram
colocados em placa de contenção e tiveram as patas
traseiras e a região dorsal tricotomizadas.
Após tricotomização e assepsia, fez-se uma incisão
na pele, de aproximadamente 1,0 cm com uma tesoura
de ponta fina, paralelamente ao longo do eixo
da tíbia. Com o auxílio de um bisturi, seccionou-se o
tecido muscular até a exposição do periósteo, que
em seguida foi rebatido cuidadosamente até a exposição
do tecido ósseo. Com o uso de um minimotor
de baixa rotação e uma broca com 2,0 mm de diâmetro,
foi feito um orifício (falha óssea) no terço superior
da tíbia de modo a permitir a introdução do
corpo de prova. Realizou-se este procedimento nas
duas tíbias das patas traseiras de cada animal. Na
tíbia da pata traseira esquerda, implantou-se o corpo
de prova, cone de Guta-percha revestido de microdiluição
dinamizada de Arnica montana (tratado) e a
tíbia da pata traseira direita recebeu somente o implante
do cone de Guta-percha que foi utilizado como
controle do processo de consolidação da falha óssea.
Posteriormente, o tecido muscular e a pele foram
suturados e sobre os cortes aplicou-se solução a-
quosa PVPI (poli vinil pirrolidona iodada) anti-séptica.
Durante as primeiras 48 horas pós-cirurgia, administrou-se
a dose de 750 mg/Kg de peso corporal de
Dipirona sódica em solução 500 mg/mL do laboratório
Aventis por via intramuscular.
3.3 Obtenção de espécimes do tecido ósseo
Os animais foram eutanasiados, de acordo com os
tempos de permanência, por aprofundamento da
anestesia de solução de Cloridrato de Xylasina (Virbaxyl
® 2%) + Ketamina (Francotar ® ),
Foram removidos espécimes do tecido ósseo das
duas tíbias. Em seguida, foram fixados por imersão
em solução de formol tamponado a 10% por 48 horas
e após esse período promoveu-se a redução do
tamanho dos espécimes para processamento histológico.

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3.4 Preparação e triagem de lâminas histológicas
Os espécimes do tecido ósseo foram descalcificados
em solução saturada de EDTA com agitação contínua
durante 30 dias. Após este período, os espécimes
foram submetidos ao processamento histológico.
Cortes de sete micrometros de espessura foram
corados com hematoxilina-eosina para a obtenção
de lâminas histológicas, posteriormente fotografadas
para análise morfométrica e semiquantitativa.
3.5 Análise Morfométrica do tecido ósseo
Após captura das imagens, foi realizada determinação
quantitativa por meio do software TPS Dig versão
1.38a, da espessura da capsula de tecido ósseo
encontrada ao redor dos implantes introduzidos na
tíbia.
Para análise dos resultados referentes aos implantes,
foram realizadas três avaliações, em regiões
eqüidistantes, ao longo cápsula do tecido ósseo formada
ao redor do implante.
3.6 Análise semiquantitativa do tecido ósseo
As lâminas dos tecidos foram submetidas à análise
microscópica, sendo verificada a presença de infiltrado
inflamatório, fibrócitos, fibroblastos e osteogênese.
4. RESULTADOS E DISCUSSÃO
Atualmente, existem quatro métodos clássicos para
a avaliação de biocompatibilidade dos materiais: avaliação
de citotoxicidade, implantes subcutâneos, implantes
intraósseos, e avaliação in vivo da reação
tecidual perirradicular em animais.
Em cada tempo de permanência dos materiais implantados
foram feitas avaliações histológicas. A resposta
tecidual foi analisada levando-se em consideração
a presença e intensidade de inflamação e de
componentes do infiltrado celular e de células associadas
ao processo cicatricial e de regeneração óssea.
4.1 Implantes com microdiluição dinamizada de
Arnica montana em falha óssea
Os animais que constituíam o grupo 24 horas (24 h)
apresentaram presença intensa de infiltrado inflamatório
predominantemente polimorfonucleado; ausência
de fibroblastos/ fibrócitos; e hemorragia intensa.
No grupo 1 semana (1 s), foi observada presença
moderada de infiltrado inflamatório, predominantemente
polimorfonuclear, com presença de poucos
plasmócitos; ausência de fibroblastos; e ausência de
hemorragia. Nos animais do grupo 2 semanas (2 s),
verificou-se discreta presença de infiltrado inflamatório;
presença intensa de fibroblastos; e ausência de
hemorragia. Por fim, no grupo 4 semanas (4 s), foi
notada ausência de infiltrado inflamatório; presença
intensa de fibroblastos; presença moderada de fibrócitos;
e ausência de hemorragia (tabela 1).
Nos tecidos que receberam o implante do cone de
guta-percha revestido da microdiluição, foi observado
na região da falha óssea proliferação osteoblástica e
formação de osso primário nos mesmos padrões e
proporções daqueles observados nas falhas ósseas
controle, seja em 24 horas, uma, duas ou quatro
semanas pós-implante. Na região do periósteo, não
se evidenciou nenhum tipo de infiltrado celular que
pudesse indicar processo inflamatório decorrente do
revestimento do implante com o material homeopático.
A osteogênese foi verificada a partir do grupo 1,
sem progressão significativa (figuras 1 e 2).
Tabela 1: Resultados da análise semiquantitativa comparativa
da celularidade óssea após implante de cones
de guta-percha com e sem revestimento de microdiluição
dinamizada de Arnica montana.
Grupo
Infiltrado
Osteogênese
Inflamatório
Tratado Controle Tratado Controle
24 h ++++ ++++ - -
1 s ++ ++ ++ ++
2 s + + ++ ++
4 s - - ++++ +++
Não há diferença significativa entre os grupos.

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Figura 2: Resultados da análise morfométrica comparativa
da espessura da cápsula do tecido ósseo após
implante de cones de guta-percha com e sem revestimento
de microdiluição dinamizada de Arnica montana.
Não há diferença significativa (p

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