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[ artigo original ] Determinação in vitro do efeito antimicrobiano direto do hidróxido de cálcio associado a diferentes substâncias frente a cepas de Enterococcus faecalis
Todas as amostras foram congeladas a -20ºC e foram
isoladas em M-Enterococcus ágar (Difco ® ). As cepas foram,
então, identificadas na sequência de uma rotina de
identificação padrão descrita por Koneman et al. 1
A ativação das amostras foi realizada em placas de
ágar M-Entorococcus (Difco ® ) em uma estufa com temperatura
em 36 o C por 18-24 horas. Posteriormente, as
colônias foram suspensas em caldo BHI (Oxoid ® ), até
que a turbidez completa do meio fosse observada.
Testes antimicrobianos das substâncias
Todas as substâncias bacterianas testadas neste estudo
foram baseadas em pasta de hidróxido de cálcio
PA (Tab. 1).
Tabela 1. Pastas empregadas no experimento.
Ca(OH) 2
+ extrato de guaçatonga em propilenoglicol
Ca(OH) 2
+ clorexidina a 1% em propilenoglicol
Ca(OH) 2
+ propilenoglicol puro
As pastas foram preparadas por meio da mistura de
2 gramas de pó para 70 gotas de cada veículo correspondente,
resultando em uma mistura com consistência
de creme dental após espatulação. Para cada material
testado, 12 gramas de pasta de hidróxido de cálcio foram
manipuladas.
Avaliação da atividade antimicrobiana
As suspensões do inóculo em caldo BHI (Oxoid ® ),
foram diluídas em 5ml de solução salina estéril para
chegar à turbidez correspondente a um padrão de
McFarland (escala 1,0 = 3 x 10 8 células/ml).
Para o teste da ação antimicrobiana, 1.200 pontas
de papel (Tanari ® , Tanariman Ltda), previamente esterilizadas
em autoclave, foram imersas nas suspensões
experimentais bacterianas por 3 minutos para alcançar
a contaminação. Depois disso, as pontas de papel
foram removidas assepticamente da suspensão bacteriana
e distribuídas na superfície de placas de Petri
estéreis. As pontas contaminadas, em seguida, foram
cobertas pelas pastas preparadas. As placas de Petri
foram fechadas e mantidas em estufa a 37 o C.
Aos períodos de 6, 24, 48 e 72 horas, e aos 7 dias,
as pontas de papel foram removidas do contato direto
com as pastas e colocadas em tubos de ensaio contendo
4ml de caldo Letheen (Difco ® ) estéreis. Os caldos
foram incubados a 37 o C por 48 horas e avaliados visualmente
quanto à turbidez macroscópica.
Um inóculo contendo 0,1ml de caldo Letheen foi
transferido para tubos de ensaio com 4ml de caldo
BHI, que foram incubados sob as mesmas condições.
Os tubos de caldo BHI teste sem evidência de turbidez
foram considerados como negativos, e os que
apresentassem turvação do caldo foram semeados em
ágar M-Enterococcus, a fim de determinar se as bactérias
permaneceram viáveis.
Todos os procedimentos experimentais foram realizados
sob condições assépticas, com o auxílio de uma
capela de fluxo laminar, e os ensaios foram realizados
em duplicata. Um experimento foi realizado com Enterococcus
faecalis padrão ATCC 29212.
O pH de cada pasta foi mensurado após a manipulação
em água deionizada, com o auxílio de um medidor
de pH.
Resultados
Os valores de pH para as pastas foram: 12,67 para
o hidróxido de cálcio + clorexidina 1%; 12,62 para o
hidróxido de cálcio + propilenoglicol; e 12,60 para o
hidróxido de cálcio + extrato de Casearia sylvestris Sw.
A avaliação da atividade antimicrobiana para as três
pastas diferentes em 6, 24, 48, 72 horas, e aos 7 dias de
pós-incubação mostrou que todas as cepas foram inibidas
em todos os períodos de avaliação (Tab. 2).
Discussão
A eficácia de pasta de hidróxido de cálcio contra E.
faecalis e outros microrganismos tem sido amplamente
discutida na literatura científica 15-19 .
A adição de clorexidina conferiu maior eficácia antimicrobiana
à pasta de hidróxido de cálcio na desinfecção
de túbulos de dentina 7 . No entanto, Schäfer et al. 17
observaram que não houve aumento de eficácia contra
o E. faecalis associando o hidróxido de cálcio à clorexidina.
Entretanto, Ercan et al. 18 , em um experimento
in vitro envolvendo dentes extraídos, verificaram que a
clorexidina gel 2% foi mais eficiente contra E. faecalis e
Candida albicans em comparação à pasta de hidróxido
de cálcio associada ou não à clorexidina a 2%.
© 2011 Dental Press Endodontics 48
Dental Press Endod. 2011 apr-june;1(1):46-51