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artigo original Determinação in vitro do efeito antimicrobiano direto do hidróxido de cálcio associado a diferentes substâncias frente a cepas de Enterococcus faecalis Paulo Henrique Weckwerth, DDS, MS, PhD 1 Natália Bernecoli Siquinelli, PharmD 2 Ana Carolina Villas Bôas Weckwerth, DDS 3 Rodrigo Ricci Vivan, DDS, MS 4 Marco Antonio Hungaro Duarte, DDS, MS, PhD 5 Resumo Objetivo: determinar o efeito antimicrobiano em contato direto de Casearia sylvestris Swart (guaçatonga), propilenoglicol, e da clorexidina associada ao hidróxido de cálcio contra 40 cepas de Enterococcus faecalis isoladas da cavidade bucal. Métodos: após a ativação, as cepas bacterianas foram suspensas em solução salina estéril até a escala 1,0 de MacFarland. A suspensão foi colocada em contato direto com hidróxido de cálcio [Ca(OH) 2 ] + propilenoglicol puro, Ca(OH) 2 + clorexidina a 1% em propilenoglicol, e Ca(OH) 2 + extrato de guaçatonga em propilenoglicol, cobrindo pontas de papel, previamente contaminadas com a solução por 3 minutos, com as diferentes pastas. A atividade antimicrobiana foi avaliada em 6, 24, 48, 72 horas, e aos 7 dias. Após o período de incubação, os cones foram retirados das pastas e incubados em caldo Letheen a 37ºC por 48 horas. Em seguida, 0,1ml do caldo Letheen foi transferido para tubos contendo infusão de cérebro e coração (BHI) e incubados em caldo novamente a 37ºC por 48 horas. A turbidez foi observada no meio. Depois disso, placas de ágar M-Enterococcus foram semeadas com caldo BHI de cada tubo e o crescimento colonial foi avaliado. Resultados: todas as cepas bacterianas foram inibidas por todas as pastas, nos períodos avaliados. Conclusões: concluiu- -se que a adição dessas substâncias ao hidróxido de cálcio não interferiu no seu efeito antimicrobiano direto. Palavras-chave: Microbiologia. Enterococcus faecalis. Hidróxido de cálcio. Produtos com ação antimicrobiana. Weckwerth PH, Siquinelli NB, Weckwerth ACVB, Vivan RR, Duarte MAH. In vitro determination of direct antimicrobial effect of calcium hydroxide associated with different substances against Enterococcus faecalis strains. Dental Press Endod. 2011 apr-june;1(1):46-51. 1 Professor de Microbiologia da Universidade Sagrado Coração de Bauru - SP. 2 Graduação em Farmácia pela Universidade Sagrado Coração de Bauru - SP. Recebido: janeiro de 2011 / Aceito: fevereiro de 2011. 3 Microbiologista no Instituto Lauro de Souza Lima em Bauru - SP. 4 Professor de Endodontia na Universidade Sagrado Coração de Bauru - SP. 5 Professor de Endodontia na Faculdade de Odontologia de Bauru da Universidade de São Paulo - Bauru - SP. Endereço para correspondência: Marco Antonio Hungaro Duarte Rua Anna Pietro Forte, 3-18 (lote A12), Residencial Villagio 1 - CEP: 17.018-820 Bauru/SP, Brasil - E-mail: mhungaro@fob.usp.br © 2011 Dental Press Endodontics 46 Dental Press Endod. 2011 apr-june;1(1):46-51
Weckwerth PH, Siquinelli NB, Weckwerth ACVB, Vivan RR, Duarte MAH Introdução O gênero Enterococcus inclui membros anteriormente classificados como estreptococos do grupo D, devido à presença do antígeno da parede celular do Grupo D, um ácido teicoico glicerol associado à membrana citoplasmática. Os enterococos são habitantes normais do trato gastrintestinal e são encontrados em menor quantidade na vagina e na uretra masculina 1 . Esses tornaram-se importantes microrganismos patogênicos em humanos, principalmente devido à sua resistência aos agentes antimicrobianos e dos fatores de virulência estudados recentemente 2 . Esses cocos gram-positivos são dispostos em pares ou em pequenas cadeias, e são muito difíceis de se diferenciar de estreptococos. São anaeróbios facultativos que prosperam a 35ºC, geralmente crescem na superfície de placas de ágar sangue como colônias gama-hemolítico, e M-Enterococcus ágar como colônias vermelho escuro ou púrpura. Os enterococos são tolerantes à bile em 40% e podem hidrolisar esculina. Além disso, eles são capazes de crescer na presença de cloreto de sódio 6,5%, e podem ser distinguidos de bactérias no gênero Staphylococcus por sua incapacidade de produzir catalase 3 . Enterococcus faecalis são frequentemente encontrados em canais radiculares após falha no tratamento endodôntico 4,5,6 . Sendo altamente resistentes a vários medicamentos, eles também estão entre os poucos microrganismos que apresentam resistência in vitro à medicação com hidróxido de cálcio. Essa resistência está relacionada com uma bomba de próton 7 ou formação de biofilme 8 . Na tentativa de superar essa resistência, a adição de diferentes substâncias ao hidróxido de cálcio tem sido proposta. Um dos aditivos sugeridos é a clorexidina, um bisbiguanídeo. A pasta de hidróxido de cálcio com clorexidina mostrou melhor ação antimicrobiana in vitro, em comparação com a pasta de hidróxido de cálcio com água 9 . Apesar do seu efeito antimicrobiano positivo, essa associação mostrou maior liberação de íons peróxido de hidrogênio, o que pode resultar em maior irritação 10 . Novas alternativas têm sido propostas em Endodontia, incluindo substâncias naturais, como própolis e fitoterápicos. Um desses agentes fitoterápicos é a infusão de Casearia sylvestris Sw ou extrato alcoólico. Essa planta é nativa da América Latina, do México à Argentina. É encontrada em todo o Brasil, sendo particularmente comum no estado de São Paulo. É popularmente conhecida como guaçatonga, erva de lagarto, vassitonga, bugre branco, entre outros nomes. A palavra “guaçatonga” originou-se do tupi-guarani (língua indígena), mostrando que essa espécie era conhecida pelas populações nativas do Brasil 11 . O extrato da guaçatonga mostrou ação anti-inflamatoria 13 e antimicrobiana 14 . No entanto, não há estudos na literatura científica mostrando se a adição de agentes fitoterápicos com hidróxido de cálcio interfere em sua ação antimicrobiana. Diante desse fato, o objetivo do presente estudo foi avaliar a sensibilidade de várias cepas de Enterococcus faecalis isoladas da cavidade bucal em contato direto com pastas de hidróxido de cálcio associada à Casearia sylvestris Sw (guaçatonga) em propilenoglicol, ao propilenoglicol puro, ou à clorexidina a 1% em propilenoglicol. Metodologia Preparação do extrato As folhas de Casearia sylvestris Sw utilizadas neste estudo foram coletadas na fazenda Lageado, da Faculdade de Ciências Agronômicas - Unesp, em Botucatu, estado de São Paulo, e identificadas no herbário da Universidade Sagrado Coração (USC) - Bauru, São Paulo, Brasil. Após a colheita e secagem, o material foi novamente desidratado em estufa de ar circulante sob temperatura controlada, até se obter peso constante. Depois disso, as folhas foram trituradas em um moinho de faca e usadas para preparar o extrato. O material desidratado foi macerado em propilenoglicol (extração de solução) numa relação de 25 gramas de pó para 200ml de solução de extração. O pó da planta permaneceu na solução de extração durante oito dias, com agitação esporádica durante esse período. O produto da extração foi armazenado em um recipiente de cor âmbar (para evitar possível interferência de luz) e à temperatura ambiente (25ºC). Cepas de Enterococccus Quarenta cepas microbianas de E. faecalis isoladas a partir da bacterioteca do laboratório de Microbiologia da USC foram usadas no presente trabalho. As cepas foram cultivadas a partir de amostras obtidas da cavidade bucal de pacientes atendidos na clínica de Endodontia do curso de Odontologia da USC em Bauru, Brasil. © 2011 Dental Press Endodontics 47 Dental Press Endod. 2011 apr-june;1(1):46-51
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