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[ artigo original ] Efeito antimicrobiano de diferentes substâncias químicas associadas ao preparo mecânico e da medicação intracanal em dentes de cães portadores de lesões periapicais induzidas
Processamento laboratorial
Os tubos tipo Eppendorf contendo as amostras foram
imediatamente transferidos ao Laboratório de
Microbiologia Endodôntica para o processamento microbiológico.
No interior da câmara de anaerobiose
(Don Whitley Scientific, Bradford, UK), os tubos foram
agitados utilizando o vortex (MA 162, Marconi, São
Paulo, SP) por 60 segundos para facilitar a dispersão
dos microrganismos. Em seguida, foram realizadas diluições
seriadas a 1/10, 1/100, 1/1.000 e 1/10.000, utilizando
Fastidious Anaerobe Broth (FAB, Lab M, Bury,
UK). Foram inoculados 50µL da amostra armazenada
em VMGA III, sem diluição e das diluições 1/100 e
1/10.000 em placas pré-reduzidas contendo Fastidious
Anaerobe Ágar (FAA, Lab M, Bury, UK) + 5% de sangue
de carneiro desfibrinado + 600μL de Menadiona 1mg/l
(Vitamin K3; 2-Methyl-1,4-naphthoquinone – SIGMA
M5625) + 600μl de Hemina 1mg/l (Hemin Bovine Minimum
80% – SIGMA H5533) as quais foram incubadas
na câmara de anaerobiose a 37ºC, numa atmosfera de
10% H 2
, 10% CO 2
e 80% N 2
até 14 dias, para permitir
a detecção de microrganismos anaeróbios estritos de
crescimento lento.
Foram também inoculados 50μl da amostra original
em uma placa de Brain Heart Infusion (BHI, Oxoid, Basingstoke,
UK) + 5% de sangue de carneiro desfibrinado,
a qual foi incubada aerobicamente em estufa a 37°C por
2 dias, para permitir o crescimento de microrganismos
aeróbios ou facultativos.
Após a incubação, o valor total de UFC foi contado
utilizando-se uma lupa com ampliação de 16x (Zeiss,
Oberkoren, Alemanha).
Caracterização microbiológica
A caracterização preliminar das espécies microbianas
foi baseada nas características das colônias (ou seja,
tamanho, cor, forma, altura, borda, superfície, textura,
consistência, brilho e hemólise) visualizadas sob lupa
estereoscópica (Lambda Let 2, instruments Co., Hong
Kong). As bactérias isoladas foram purificadas através
de subcultura. A coloração de Gram e os requerimentos
gasosos foram estabelecidos após verificação do crescimento
microbiano em aerobiose e anaerobiose.
Baseados nas características de colônias microbianas,
na coloração de Gram e nos requerimentos gasosos,
foi possível determinar o perfil da microbiota dos
canais radiculares em momentos diferentes (s1, s2, s3).
Forma de análise dos resultados
Foram realizadas comparações estatísticas de
todos os grupos (I a V) nos mesmos momentos de
amostragem (s1, s2, s3) e entre s1, s2 e s3 em cada
% Redução bacteriana
100%
99,5%
d
d
c c c c c
d
s2
s3
99%
98,5%
98%
97,5%
97%
96,5%
96%
95,5%
a*
b
95%
Solução Salina Gel Natrosol 2,5% NaOCI CHX-gel 2% CHX-solução 2%
Figura 1. Valores percentuais médios de redução bacteriana (UFC) das amostras do canal radicular obtida após instrumentação (s2) e após a medicação
(s3). *Letras diferentes representam diferenças do ponto de vista estatístico (P