XIX CONGRESSO DE PÓS-GRADUAÇÃO DA UFLA
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XIX CONGRESSO DE PÓS-GRADUAÇÃO DA UFLA 27 de setembro a 01 de outubro de 2010 MÉTODOS Estratégia de pesquisa: Uma pesquisa eletrônica foi realizada no mês de novembro de 2009, utilizando o banco de dados PubMed com as seguintes palavras: ("cow" OR "bovine") AND ("mastitis" AND "Staphylococcus aureus") AND ("vaccine"). Para confirmar a busca e também com o intuito de obter trabalhos suplementares, estratégia similar foi utilizada no banco de dados Web of Science. Seleção dos estudos: Foram selecionados apenas estudos nos quais foram testadas vacinas in vivo na espécie bovina, ou seja, trabalhos in vivo que utilizaram camundongos, ratos, coelhos e cobaios foram excluídos. Resultados não concordantes em relação à virulência em camundongos e bovinos de amostras de S. aureus isoladas de mastite bovina já foram relatados (CHANG et al., 2008). Todos os tipos de vacinas foram selecionados, com o intuito de se verificar o efeito dos diferentes protocolos vacinais na resposta imune e na proteção frente ao desafio experimental ou frente às infecções naturais durante a lactação. Não houve restrição de data nem de número de animais para os artigos selecionados. Apenas artigos em inglês foram incluídos. Extração dos dados: Dois autores realizaram as buscas separadamente e posteriormente conferiram os artigos selecionados de acordo com os critérios de inclusão. Quando houve divergência entre os artigos encontrados, todos os critérios foram revisados e discutidos. Os dados relacionados ao delineamento experimental dos artigos estão apresentados na Tabela 1. Critérios de qualidade: Nem todos os parâmetros utilizados foram pontuados em escala de qualidade, porém foram levados em consideração por poderem ser relevantes para posterior discussão (como por exemplo, o tipo de vacina, o tipo de adjuvante utilizado, se a vacina é oriunda de uma estipe autógena ou não). Adaptados de acordo com outras revisões sistemáticas (NEGRI et al., 2009; NOLI & AUXILIA, 2005), alguns parâmetros foram classificados como adequados (score= 2), não claros ou parcialmente adequados (score= 1) e inadequados (score= 0). Alguns parâmetros foram classificados apenas como adequados (score= 1) ou inadequados (score= 0). Os parâmetros pontuados foram: Número amostral; Randomização; Detecção de animais negativos para S. aureus antes do experimento; Realização de desafio experimental; Estirpe bacteriana utilizada no desafio experimental; Indução da resposta imune celular e humoral; Nível de proteção vacinal frente ao desafio experimental ou a infecções naturais por S. aureus durante a lactação; Efeito vacinal adverso; Efeito na contagem de células somáticas (CCS). O ranqueamento dos trabalhos de acordo as pontuações dos parâmetros se encontra na Tabela 1, sendo a pontuação máxima de 15 pontos. RESULTADOS A busca pelo banco de dados PubMed resultou em 57 artigos, sendo que 14 foram excluídos por não realizarem estudos in vivo na espécie bovina, 7 por serem artigos de revisão de literatura e 14 por estudarem apenas estrutura de antígenos e/ou proteínas bacterianas. Com isso, um total de 22 artigos foram selecionados para este trabalho. Dos 22 artigos selecionados, em 16 deles se testaram vacinas de bacterinas (bactérias inativadas) usando uma única ou mais de uma estirpe bacteriana, toxoide e diferentes adjuvantes. Em dois artigos, se testaram bactérias vivas como vacina (cepa atenuada e cepa mutante avirulenta). Dois outros trabalhos testaram vacinas de DNA mais proteínas recombinantes e em outro estudo testou apenas proteína recombinante. Um estudo testou a infusão intramamária de lipopolissacarídeos (LPS) de E. coli com o intuito de aumentar a resposta inflamatória local e com isso impedir a adesão e invasão da glândula mamária por S. aureus. Dois trabalhos adicionais, ausentes na busca do PubMed, foram selecionados na busca feita na base de dados da Web of Science. Estes dois trabalhos estudam o efeito de vacinas de bacterinas utilizando diferentes adjuvantes. Nove trabalhos testaram o efeito protetor da vacina realizando desafio experimental in vivo em bovinos. Desses nove trabalhos, apenas cinco resultaram em proteção de pelo menos 50% dos quartos mamários infectados, um resultou em proteção intermediária (entre 30% a 50%) e três resultaram em baixa proteção. O número de animais utilizados por grupo experimental nesses
XIX CONGRESSO DE PÓS-GRADUAÇÃO DA UFLA 27 de setembro a 01 de outubro de 2010 trabalhos variou de três a 10 animais e a dose bacteriana utilizada no desafio experimental variou de 50 a 8000 UFC (unidades formadoras de colônias). Tabela 1- Pontuação dos critérios de avaliação dos artigos selecionados. Autor 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Total Leitner et al., 2003ª 1 2 1 1 1 1 2 1 1 11 Shkreta et al., 2004 1 2 1 2 1 1 2 0 1 11 Chang et al., 2008 1 2 1 1 1 1 2 1 1 11 Watson 1984 1 1 1 2 1 0 2 0 2 10 Hu et al., 2003 1 2 0 2 1 1 0 0 2 9 Pellegrino et al., 2008 1 2 1 1 1 1 0 0 2 9 Prenafeta et al., 2009 1 2 1 1 1 1 0 0 2 9 Nickerson et al., 1993 1 1 1 1 1 1 1 0 1 8 O'brien et al., 2000 1 2 0 2 0 1 0 0 2 8 Carter e Kerr 2003 1 2 0 2 0 1 0 0 2 8 Derosa e Sordillo, 1997 0 0 1 1 1 0 2 0 2 7 Leitner et al., 2003b 2 2 0 1 0 1 0 1 1 8 Watson et al., 1994 1 2 0 0 2 0 0 0 1 6 Watson et al., 1996 2 1 0 0 0 1 0 0 2 6 Calzolari et al., 1997 2 1 0 0 0 1 0 0 2 6 Hoedemaker et al., 2001 2 1 0 1 0 1 0 0 1 6 Kauf et al., 2007 1 1 1 0 1 1 0 0 1 6 Middleton et al., 2009 2 2 0 0 0 1 0 0 1 6 Yoshida et al., 1984 2 0 0 0 0 1 0 0 2 5 Nordhaug et al., 1994b 2 0 0 1 0 0 0 0 2 5 Tenhagen et al., 2001 2 1 0 0 0 1 0 0 1 5 Lee et al., 2005 1 0 0 2 0 1 0 0 1 5 Nordhaug et al., 1994ª 2 0 0 0 0 0 0 0 2 4 Giraudo et al., 1997 1 0 0 0 0 1 0 0 2 4 1- Número médio de animais por grupo experimental: score 0 (< que 4 animais/grupo), score 1 (4-19 animais/grupo) e score 2 (igual ou acima de 20 animais/grupo). 2- Forma de detecção de animais negativos antes do experimento: foram classificados como adequados (score= 2) os estudos em que os animais foram submetidos a testes sorológicos (ELISA) comprovando não terem tido exposição prévia à bactéria ou antígeno utilizado na vacina. Trabalhos que fizeram apenas testes por exemplo: California Mastitis Test-CMT e cultura bacteriana do leite de cada quarto mamário foram classificados como parcialmente adequados (score= 1). Já apenas avaliação clínica da glândula mamária foram classificados como inadequados (score= 0). 3- Desafio in vivo:adequados (score= 1) quando realizaram o desafio experimental in vivo e inadequados (score= 0) quando não realizaram. 4- Avaliação do efeito da vacina na resposta imune: boa proteção frente ao desafio experimental ou infecção natural (score= 2), proteção > que 50% dos quartos mamários desafiados, intermediários (score= 1) proteção entre 30 e 50% e com baixa proteção (score= 0) < que 30% ou trabalhos que não fizeram desafio experimental. 5- Vacina testada com amostras homólogas e heterólogas: cepas bacterianas homólogas e heterólogas (score= 2), cepas bacterianas homólogas ou heterólogas (score= 1) quando testado apenas com incidência natural de infecções de S. aureus (score= 0). 6- Efeito adverso: presença de efeitos adversos (granulomas, abscessos, dor à palpação) (score= 0) sem efeitos adversos (score= 1). 7- Nível de proteção ao desafio exposto (desafio experimental): adequados (score= 2) resposta imune humoral e celular in vitro no grupo vacinado foi significativamente maior que no grupo controle, parcialmente adequados (score= 1) quando apenas a resposta imune humoral do grupo vacinado foi significativamente maior que o grupo controle e inadequados (score= 0) quando não houve mensuração de nenhum parâmetro de imunidade ou não houve diferença estatística entre os grupos. 8- Redução de CCS no grupo vacinado após desafio: score= 1 quando a vacina resultou em redução significativa da CCS e score= 0 quando não houve a redução da CCS ou quando não determinada. 9- Tipo de ensaio: adequados (score= 2), inadequados (score= 0) trabalhos não randomizados e não claros (score=1). Os trabalhos que apresentaram melhores resultados em relação à proteção contra novas infecções foram os que apresentaram as maiores pontuações de acordo com os critérios de qualidade avaliados. Seis desses nove trabalhos fizeram o desafio experimental com estirpes heterólogas e apenas dois deles foram randomizados. Dos estudos in vivo, apenas duas das vacinas estudadas, classificadas como de boa proteção, apresentaram efeito adverso (abscessos/ inchaço e elevação da temperatura retal) após sua aplicação (Tabela 1). Os tipos de vacinas utilizadas nestes trabalhos os quais resultaram em proteção acima de 50% dos quartos infectados foram: bacterina de três estirpes bacterianas distintas, vacina viva atenuada, vacina de DNA mais proteína recombinante e vacina de proteína recombinante.
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<strong>XIX</strong> <strong>CONGRESSO</strong> <strong>DE</strong> PÓS-GRADUAÇÃO <strong>DA</strong> <strong>UFLA</strong><br />
27 de setembro a 01 de outubro de 2010<br />
MÉTODOS<br />
Estratégia de pesquisa:<br />
Uma pesquisa eletrônica foi realizada no mês de novembro de 2009, utilizando o banco de<br />
dados PubMed com as seguintes palavras: ("cow" OR "bovine") AND ("mastitis" AND<br />
"Staphylococcus aureus") AND ("vaccine"). Para confirmar a busca e também com o intuito de obter<br />
trabalhos suplementares, estratégia similar foi utilizada no banco de dados Web of Science.<br />
Seleção dos estudos:<br />
Foram selecionados apenas estudos nos quais foram testadas vacinas in vivo na espécie<br />
bovina, ou seja, trabalhos in vivo que utilizaram camundongos, ratos, coelhos e cobaios foram<br />
excluídos. Resultados não concordantes em relação à virulência em camundongos e bovinos de<br />
amostras de S. aureus isoladas de mastite bovina já foram relatados (CHANG et al., 2008).<br />
Todos os tipos de vacinas foram selecionados, com o intuito de se verificar o efeito dos<br />
diferentes protocolos vacinais na resposta imune e na proteção frente ao desafio experimental ou frente<br />
às infecções naturais durante a lactação. Não houve restrição de data nem de número de animais para<br />
os artigos selecionados. Apenas artigos em inglês foram incluídos.<br />
Extração dos dados:<br />
Dois autores realizaram as buscas separadamente e posteriormente conferiram os artigos<br />
selecionados de acordo com os critérios de inclusão. Quando houve divergência entre os artigos<br />
encontrados, todos os critérios foram revisados e discutidos.<br />
Os dados relacionados ao delineamento experimental dos artigos estão apresentados na<br />
Tabela 1.<br />
Critérios de qualidade:<br />
Nem todos os parâmetros utilizados foram pontuados em escala de qualidade, porém foram<br />
levados em consideração por poderem ser relevantes para posterior discussão (como por exemplo, o<br />
tipo de vacina, o tipo de adjuvante utilizado, se a vacina é oriunda de uma estipe autógena ou não).<br />
Adaptados de acordo com outras revisões sistemáticas (NEGRI et al., 2009; NOLI & AUXILIA,<br />
2005), alguns parâmetros foram classificados como adequados (score= 2), não claros ou parcialmente<br />
adequados (score= 1) e inadequados (score= 0). Alguns parâmetros foram classificados apenas como<br />
adequados (score= 1) ou inadequados (score= 0). Os parâmetros pontuados foram: Número amostral;<br />
Randomização; Detecção de animais negativos para S. aureus antes do experimento; Realização de<br />
desafio experimental; Estirpe bacteriana utilizada no desafio experimental; Indução da resposta imune<br />
celular e humoral; Nível de proteção vacinal frente ao desafio experimental ou a infecções naturais por<br />
S. aureus durante a lactação; Efeito vacinal adverso; Efeito na contagem de células somáticas (CCS).<br />
O ranqueamento dos trabalhos de acordo as pontuações dos parâmetros se encontra na<br />
Tabela 1, sendo a pontuação máxima de 15 pontos.<br />
RESULTADOS<br />
A busca pelo banco de dados PubMed resultou em 57 artigos, sendo que 14 foram excluídos<br />
por não realizarem estudos in vivo na espécie bovina, 7 por serem artigos de revisão de literatura e 14<br />
por estudarem apenas estrutura de antígenos e/ou proteínas bacterianas. Com isso, um total de 22<br />
artigos foram selecionados para este trabalho. Dos 22 artigos selecionados, em 16 deles se testaram<br />
vacinas de bacterinas (bactérias inativadas) usando uma única ou mais de uma estirpe bacteriana,<br />
toxoide e diferentes adjuvantes. Em dois artigos, se testaram bactérias vivas como vacina (cepa<br />
atenuada e cepa mutante avirulenta). Dois outros trabalhos testaram vacinas de DNA mais proteínas<br />
recombinantes e em outro estudo testou apenas proteína recombinante. Um estudo testou a infusão<br />
intramamária de lipopolissacarídeos (LPS) de E. coli com o intuito de aumentar a resposta<br />
inflamatória local e com isso impedir a adesão e invasão da glândula mamária por S. aureus.<br />
Dois trabalhos adicionais, ausentes na busca do PubMed, foram selecionados na busca feita<br />
na base de dados da Web of Science. Estes dois trabalhos estudam o efeito de vacinas de bacterinas<br />
utilizando diferentes adjuvantes.<br />
Nove trabalhos testaram o efeito protetor da vacina realizando desafio experimental in vivo<br />
em bovinos. Desses nove trabalhos, apenas cinco resultaram em proteção de pelo menos 50% dos<br />
quartos mamários infectados, um resultou em proteção intermediária (entre 30% a 50%) e três<br />
resultaram em baixa proteção. O número de animais utilizados por grupo experimental nesses
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