ESTUDO DA INFLUÃNCIA DE PSICROTRÃFICOS AERÃBIOS E DE ...

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aproximadamente a 47 ± 2 ºC. Manter os frascos a esta temperatura até utilização, sem exceder 6 h. Anexo 4 - Composição e modo de preparação do meio ALOA (http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/m10a.html) Composição Peptona de carne 18,00 g Triptona 6,00 g Extracto de levedura 10,00 g Piruvato de sódio 2,00 g Glucose 2,00 g Glicerofosfato de magnésio 1,00 g Sulfato de magnésio 0,50 g Cloreto de sódio 5,00 g Cloreto de lítio 10,00 g Hidrogenofosfato dissódico 2,50 g 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-glucopiranosida 0,05 g Agar (dependendo da força de gelificação) 12 gr – 18 g Água destilada (dependendo do volume de suplemento) 925 L – 930 L (pH 7,2 ± 0,2) Procedimento 1. Dissolver a base desidratada em água a ferver. 2. Esterilizar no autoclave a 121 ºC durante 15 min. 3. Preparar o suplemento (L-α-fosfatidil-inositol) dissolvendo 2 g deste em 50 mL de água destilada fria e agitar durante cerca de 30 min até obter uma suspensão homogénea. 4. Dissolver os seguintes componentes individualmente nos solventes específicos e filtrar as soluções para esterilizar: 0,02 g de Ácido nalídixico em 5 mL de água; 0,02 g de Ceftazidima em 5 mL de água; 76700 U de Polimixina B em 5 mL de água; 0,05 g de Cicloheximida em 2,5 mL de etanol e adicionar 2,5 mL de água; 0,01 g de Anfotericina B numa mistura de 2,5 mL de ácido clorídrico (HCl) (1 M) e 7,5 mL de Dimetilformamida. 3
5. Misturar os seguintes constituintes para completar o meio: 925 - 930 mL de agar base; 5 mL da solução de ácido nalídixico; 5 mL da solução de Ceftazidima; 5 mL da solução de Cicloheximida (ou 10 mL da solução de Anfotericina B); 5 mL da solução de Polimixina B e 50 mL da solução de L- α-fosfatidil-inositol. Anexo 5 - Composição e modo de preparação do meio TSA (www.biomerieux.pt) Composição Peptona de caseína (bovina) 15 g Peptona de soja 5 g Cloreto de sódio 5 g Agar 15 g Água destilada 1 L (pH 7,3) Procedimento 1. Deixar as placas atingir a temperatura ambiente. Anexo 6 - Composição e modo de preparação do meio Ryan (www.oxoid.com) Composição Peptona 5,00 g Extracto de levedura 3,00 g Monocloridrato de L-Lisina 3,50 g Monocloridrato de L-Arginina 2,00 g Sorbitol 3.00 g Inositol 2,50 g Lactose 1,50 g Xylose 3,75 g Sais biliares Nº 3 3,00 g Tiosulfato de sódio 10,67 g Cloreto de sódio 5,00 g 4
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