ESTUDO DA INFLUÊNCIA DE PSICROTRÓFICOS AERÓBIOS E DE ...

3.5.2 – Objectivo da contaminação
Para avaliação da capacidade de multiplicação de L. monocytogenes em saladas
conservadas no frigorífico, foram contaminadas 27 das 67 amostras analisadas.
Depois de realizadas as análises microbiológicas acima referidas, foram retiradas duas
aliquotas de 10 g cada para serem contaminadas com as duas estirpes de L.
monocytogenes referidas em 3.1. Após contaminação foram efectuadas contagens de
L. monocytogenes, uma de imediato e outra após conservação no frigorífico até ao
final do prazo de validade inscrito nas embalagens das saladas.
Assim, isolou-se uma colónia de L. monocytogenes para um tubo contendo 9 mL de
triptona sal (Diluição mãe – Diluição 10 -1 ). Realizaram-se duas diluições décimais da
suspensão mãe, obtendo-se uma diluição de 10 -3 de L. monocytogenes.
As duas porções de 10 g da salada pesadas foram colocadas em sacos próprios para
Stomacher (Seward Limited, London, U.K.). Seguidamente, no interior de uma câmara
de segurança biológica (Microflow 20134, Andover, UK) contaminou-se cada uma das
tomas de salada com 1 mL da diluição de 10 -3 de L. monocytogenes anteriormente
preparada, sendo posteriormente homogeneizada em Stomacher (Stomacher 400
“Circulator”, Seward Limited, London, UK). Um dos sacos foi armazenado à
temperatura de refrigeração (±7ºC), com o propósito de simular as condições de
armazenamento em frigorífico de saladas MP, após abertura, em casa dos
consumidores. Ao outro saco foram adicionados 90 mL de BPW (Diluição mãe –
Diluição 10 -1 ), o qual foi homogeneizado novamente em Stomacher, ficando de
seguida em repouso durante 1 h ± 5 min. Esta etapa inicial de enriquecimento é quase
sempre usada para facilitar a recuperação de organismos lesados que podem ser
encontrados em amostras de alimentos (Fröder, 2005). Após este período, realizaramse
diluições decimais de cada uma das amostras das saladas contaminadas até à
diluição 10 -3 e inoculou-se por espalhamento 0,1 mL de cada uma destas diluições em
meio ALOA, sendo posteriormente colocadas na estufa durante 48h a 37ºC.
No último dia do prazo de validade da salada, a amostra colocada em refrigeração foi
retirada. Tal como na amostra de salada colhida na mesma altura, adicionaram-se 90
mL de BPW para preparação da diluição mãe e repetiu-se o procedimento
anteriormente realizado com a outra amostra de salada analisada.
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