ESTUDO DA INFLUÊNCIA DE PSICROTRÓFICOS AERÓBIOS E DE ...

a presença ou ausência destes microrganismos, comparando o resultado com a recta
de calibração, previamente introduzida no aparelho mini-VIDAS. Aquando da abertura
de um novo “kit” mini-VIDAS (bioMerieux® SA, Marcy L’Étoile, França) (Figura 12)
introduziu-se o respectivo código de barras. Do “kit” de utilização fazem parte os
cones, que servem de fase sólida e de sistema de pipetagem para o teste. Os cones
encontram-se revestidos interiormente por anticorpos monoclonais (ou policlonais
consoante o microrganismo) específicos para o agente microbiano em pesquisa. Os
restantes reagentes necessários à reacção imunológica encontram-se repartidos na
“barrete” (Figura 13). Se o microrganismo alvo estiver presente na amostra, ocorrerá
reacção antigénio-anticorpo, e posteriormente, pela adição de um conjugado
(anticorpo ligado a fosfatase alcalina), bem como de um substrato contendo o
fluorocromo 4-Metil-umbeliferil fosfato, que permitirá a emissão de fluorescência,
sendo esta detectada pelo sistema VIDAS.
Figura 12 - Aparelho mini-VIDAS; Figura 13 - Barrete e cone mini-VIDAS
3.4.4.9.1 – Método utilizado na pesquisa de Salmonella spp.
Para a pesquisa de Salmonella spp., foi efectuado um pré-enriquecimento em BPW,
com incubação durante 16 a 20 horas, a 37 ºC ± 1 ºC. Após este período de
incubação, foi feito o enriquecimento selectivo, inoculando-se 0,1 mL em RVS-T e 1
mL em MKTTn-T, que foram incubados, respectivamente, a 41,5 ºC ± 1 ºC e 37 ºC ± 1
ºC, durante 6 a 8 horas. Posteriormente, efectuou-se um pós-enriquecimento sendo
retirado 1 mL do crescimento em RVS-T que se inoculou no meio M, e 0,1 mL do
crescimento em MKTTn-T que se inoculou num outro tubo, do referido meio M. A
incubação de ambos os tubos contendo o meio M foi feita a 41,5 ºC ± 1 ºC por 16 a 20
h. Após o período de incubação, retirou-se 1 mL de cada tubo do meio M e colocou-se
num tubo estéril, sujeitando-se à temperatura de 95 a 100 ºC, durante 15 min (± 1
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