ESTUDO DA INFLUÊNCIA DE PSICROTRÓFICOS AERÓBIOS E DE ...

(neste caso, apenas a diluição 10 -1 ) por espalhamento em superfície. A incubação foi
feita a 37 ºC ± 1 ºC durante 24 h e, se necessário, foi mantida por mais 24 h, até um
máximo de 72 h. As colónias azuis, presuntivas de Listeria spp. foram passadas para
TSA. A partir das colónias assim obtidas efectuou-se o teste da catalase e a todas as
colónias positivas neste teste foi realizada a caracterização bioquímica por API
Listeria.
3.4.4.6 – Métodos utilizados na contagem de Clostridium perfringens
A contagem de C. perfringens foi efectuada seguindo a norma ISO 7937:2004. Este
procedimento consistiu na inoculação de 1 mL das diluições consideradas necessárias
(neste caso usámos a diluição 10 -1 ), por incorporação, em camada dupla, utilizando o
meio TSC, com incubação durante 24 h a 37 ºC ± 1 ºC, em jarra de anaerobiose.
3.4.4.7 – Métodos utilizados na contagem de Aeromonas hydrophila
Para a contagem de A. hydrophila foi seguida a metodologia preconizada pela Health
Protection Agency (HPA/ Colindale, U.K.). Neste procedimento foram semeados 0,1
mL das diluições consideradas necessárias (usámos as diluições 10 -1 e 10 -2 ), por
espalhamento à superfície em gelose Ryan, sendo as placas incubadas à temperatura
de 30 ºC ± 1 ºC durante 18 a 24 h. As colónias presuntivas, verdes escuras, opacas e
com a zona central mais escura, lidas por comparação com a estirpe padrão cultivada
nas mesmas condições, foram isoladas (um mínimo de 3 colónias por placa) em meio
TSA. A partir dos isolados assim obtidos foi efectuado o teste da oxidase. Nos casos
que revelaram a presença desta enzima foram efectuados os seguintes testes
bioquímicos de diagnóstico: glucose, Voges-Proskauer (VP), lisina, arginina, ornitina,
manitol e inositol.
Posteriormente foram efectuados testes bioquímicos miniaturizados para identificação
de bactérias Gram negativas (API 20E) a partir de todas as culturas isoladas que
revelaram resultados nos testes de diagnóstico coincidentes com os apresentados no
Quadro 5
36