ESTUDO DA INFLUÊNCIA DE PSICROTRÓFICOS AERÓBIOS E DE ...

microrganismos, isto é, de forma a permitir o desenvolvimento de todos os
microrganismos viáveis capazes de se multiplicarem nas condições de ensaio.
3.4.4.3 – Métodos utilizados na contagem de Enterobacteriaceae
A contagem das bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae, foi realizada
seguindo a norma ISO 21528-2:2004b, que preconiza a utilização do meio VRBG,
semeado por incorporação com 1 mL de inoculo, em camada dupla, incubando as
placas a 37 ºC ± 1 ºC durante 24 ± 2 h. Nestes ensaios foram semeados inoculos
correspondentes às diluições 10 -2 a 10 -5 .
Para confirmação das colónias presuntivas, foi feita a avaliação quanto à produção de
oxidase e à fermentação da glucose.
3.4.4.4 – Método utilizado na contagem de Escherichia coli
A contagem de E. coli foi efectuada seguindo a norma ISO 11649-2:2001. Este
procedimento consistiu na inoculação de 1 mL das diluições consideradas necessárias
(neste caso usámos a diluição 10 -1 ), por incorporação, utilizando o meio TBX, com
incubação até um máximo de 24 h a 44 ºC ± 1 ºC.
As estirpes das amostras que se revelaram positivas, apresentando colónias com
coloração azul, como referido em 3.3.3, foram enviadas para a Unidade de
Enterobactérias do INSA, para detecção de factores de patogenecidade pelo método
de Polimerase Chain Reaction (PCR) multiplex.
3.4.4.5 – Métodos usados na contagem de Listeria monocytogenes
Na contagem de Listeria spp. foi seguida a metodologia descrita na norma ISO
11290-2:1998/ Amd.1:2004. O procedimento compreende a incubação da suspensão
inicial (10 -1 ) a 20 ºC ± 2 ºC durante 1h ± 5 min. Após o período de incubação inoculouse
o meio de cultura ALOA, com 0,1 mL das diluições consideradas necessárias
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