ESTUDO DA INFLUÊNCIA DE PSICROTRÓFICOS AERÓBIOS E DE ...

3.4.4.1 – Método utilizado na preparação das diluições decimais
Fizeram-se diluições décimais sucessivas até à diluição 10 -6 , com base no nível de
contaminação esperado. Esta metodologia consiste em adicionar 1 mL da suspensão
inicial a 9 mL de TS preparando assim a diluição 10 -2 . A partir desta, é preparada de
igual modo a diluição 10 -3 e assim sucessivamente até à 10 -6 (Figura 11).
Figura 11 – Esquema de diluições sucessivas (adaptado de Pampulha e Oliveira,
2004/2005)
3.4.4.2 – Método utilizado na contagem de microrganismos
psicrotróficos
Para a contagem total dos microrganismos psicrotróficos foi seguida uma metodologia
baseada na norma ISO 1741:2001. Este método consiste em semear 1 mL das
diluições consideradas necessárias de modo a obter placas contáveis (neste caso
usámos da diluição 10 -2 à diluição 10 -6 ) por incorporação em meio PCA. As placas
inoculadas, após solidificação, foram invertidas e incubadas a 6,5ºC durante 10 dias.
Após o período de incubação foram seleccionadas as placas contáveis, ou seja,
aquelas que continham menos de 300 colónias, sendo nestas placas contadas todas
as colónias desenvolvidas, tanto à superfície como no interior do agar. No processo de
contagem em placa (manual) foram consideradas todas as colónias presentes,
independentemente da sua morfologia. Neste método foi utilizado um meio de cultura
não selectivo, de forma a não ocorrer qualquer tipo de inibição do crescimento de
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