ESTUDO DA INFLUÃNCIA DE PSICROTRÃFICOS AERÃBIOS E DE ...

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3.4.1 – Transporte e recepção das amostras As saladas adquiridas para realização deste trabalho de investigação foram transportadas para o Laboratório de Microbiologia de Alimentos do Instituto Nacional de Saúde Dr. Ricardo Jorge (INSA) em mala térmica, a uma temperatura entre 1ºC e 8ºC, monitorizada regularmente com uma sonda Tomprobe (Réf. MD30100. AES Laboratoires TM , Rennes, França) (Anexo 30), num período máximo de 30 minutos após aquisição. Ao chegarem ao laboratório as embalagens de origem foram recepcionadas, identificadas e armazenadas em frigorífico, a temperatura controlada (3 ºC ± 2 ºC), até ao momento de realização das análises (no espaço de tempo mais curto possível e sempre antes do final do seu prazo de validade). A recepção e identificação foram efectuadas através da atribuição de um número de amostra, de modo a assegurar o seu acompanhamento até à saída do resultado final, registando-se sempre as seguintes informações: data de compra, local de aquisição, marca, variedade, lote de fabrico e prazo de validade. 3.4.2 – Método utilizado na colheita das tomas de amostras As tomas de amostra foram colhidas respeitando criteriosamente as regras de assepsia. As embalagens de origem foram desinfectadas com o auxílio de algodão embebido em álcool a 70% e posteriormente foram cortadas com o auxílio de uma tesoura esterilizada, tendo este procedimento sido efectuado num raio de 15 cm da chama do bico de Bunsen. Foram então colhidas, com o auxílio de uma pinça esterilizada (Figura 8) três tomas das amostras para sacos esterilizados próprios para “Stomacher” (PE dim 177x304 mm com tela filtrante, Seward Limited, London, UK) devidamente identificados com o número da amostra, data e hora da colheita e referência do ensaio ao qual se destinava. (Quadro 3). 30
Figura 8 – Operação de toma de amostras para realização dos ensaios Quadro 3 – Peso das tomas das amostras de acordo com o ensaio a efectuar Ensaio Toma da amostra para ensaio Diluente/ Meio de cultura utilizado - Contagens em placa - Pesquisa de Salmonella spp. - Pesquisa de L. monocytogenes - Pesquisa de E. coli O157 27 g * BPW 25 g ** cF-d 25 g *** mTSB+N * 1ª toma; ** 2ª toma; *** 3ª toma 3.4.3 – Método utilizado na diluição de tomas de amostras Dado que este trabalho foi realizado com alimentos sólidos procedeu-se a uma etapa inicial de preparação da amostra com efectivação de uma suspensão inicial (diluição primária), que tem por finalidade transformar a heterogeneidade de uma amostra sólida, numa amostra líquida, homogénea e representativa do alimento a analisar. O objectivo será obter uma distribuição o mais homogénea possível dos microrganismos contidos nos componentes sólidos da amostra. Posteriormente foram preparadas diluições décimais sucessivas, de modo a reduzir o número de microrganismos por unidade de volume semeado e permitir assim efectuar uma contagem de ufc, após o período de incubação, conforme descrito em cada norma específica utilizada. Estes procedimentos foram efectuados de acordo com as regras preconizadas na norma ISO 6887-1:1999. 31
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