ESTUDO DA INFLUÊNCIA DE PSICROTRÓFICOS AERÓBIOS E DE ...

3.3.3 – Meios utilizados na contagem de Escherichia coli
Para realizar a contagem de E. coli utilizou-se o meio de cultura sólido Tryptone Bile
X-Glucuronide (TBX) (Bio-Rad TM , Marne-la-Coquette, França) (Anexo 3). Em
comparação com outros meios existentes anteriormente este último apresenta as
vantagens de permitir uma detecção mais rápida, uma maior recuperação e ainda
permitir a detecção de estirpes com fraca fermentação da lactose. Este meio contém
um substrato cromogénico – 5-bromo-4-cloro-3-indoxil-β-D-glucoronidase (Xglucoronideo),
que é degradado pela enzima
β-glucoronidase, produzida pela maior parte das estirpes de E. coli (apenas 3 a 4%
são
β-glucoronidase negativas, incluindo o serovar O157) por quebra da ligação do açúcar
com o cromogénio. O facto de se tratar de uma substância insolúvel promove a sua
acumulação no interior da célula, levando à formação de colónias azuis muito fáceis
de identificar e diferenciar da flora envolvente (Figura 3), não sendo necessária
confirmação. O meio TBX apresenta ainda sais biliares que inibem o crescimento das
bactérias Gram positivas (www.bio-rad.com).
Figura 3 – Colónias características de Escherichia coli (http://images.google.pt)
3.3.4 – Meios utilizados na contagem de Listeria spp.
A contagem de Listeria spp. foi feita através da utilização de Agar Listeria segundo
Ottaviani & Agosti (ALOA) (bioMerieux® SA, Marcy L’Étoile, França; CHROMagar,
Paris, França; Laboratoires AES TM , Bruz, França) (Anexo 4). Este meio é baseado na
detecção simultânea das actividades de phosphatidylinositol-specific phospholipase C
(PIPLC) e de β-glucosidase. A enzima PIPLC, associada ao processo de virulência,
está presente em
L. monocytogenes. No meio ALOA, esta actividade é detectada através da degradação
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