ΠαÏÎ¿Ï ÏίαÏη
ΠαÏÎ¿Ï ÏίαÏη
ΠαÏÎ¿Ï ÏίαÏη
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΟΥ ΓΕΝΟΥΣ ΤΩΝ<br />
ΜΥΚΟΒΑΚΤΗΡΙΔΙΩΝ<br />
• Γένος Μycobacterium (G+C 60-70% DNA)<br />
• Μέγεθος:0.2-0.6 * 1-10 μm<br />
• Αερόβιο, μη-κινητό,Δεν σχηματίζει σπόρια.<br />
• Ανθίστανται στον αποχρωματισμό από οξέα-αλκοόλη<br />
• Θεωρούνται Θετικά κατά Gram –βάκιλοι<br />
• Σχηματίζουν αποικίες που είναι χαρακτηριστικές για το<br />
κάθε είδος<br />
• Ορισμένα είδη παράγουν έγχρωμες αποικίες<br />
• Πολ/σιάζονται με αργό ρυθμό 2-20 ώρες και οι αποικίες<br />
σε καλλιέργειες είναι ορατές από 2 ημέρες μέχρι 8<br />
εβδομάδες<br />
• Τα περισσότερα είδη αναπτύσσονται εύκολα σε απλά<br />
θρεπτικά υλικά ( Αμμωνία,γλυκερόλη, ορυκτά άλατα)
ΤΟΥ ΓΕΝΟΥΣ ΤΩΝ ΜΥΚΟΒΑΚΤΗΡΙΔΙΩΝ<br />
• Μ TUBERCULOSIS COMPLEX<br />
• NONTUBERCULOUS MYCOBACTERIA<br />
• MYCOBACTERIUM LEPRAE
ΧΡΟΝΟΛΟΓΙΚΗ ΕΞΕΛΙΞΗ ΤΟΥ<br />
Μ TBC<br />
• Υπάρχει στη γη περισσότερο από 20.000 χρόνια<br />
• Η μελέτη του SNP αποτελεί το βιολογικό<br />
χρονόμετρο του Μυκοβακτηριδίου<br />
• Εχεί βρεθή σε Μούμιες της προ-Κολουμβιανής<br />
περιόδου στο ECUADOR Kαι σε μούμιες από τις<br />
πυραμίδες της Αιγύπτου<br />
• Το Μυκοβακτηρίδιο κατά την εξέλιξη του χάνει<br />
γεννετικό υλικό (DELETION)<br />
.
Μ TBC KAI ΞΕΝΙΣΤΕΣ<br />
• ΑΝΘΡΩΠΟΣ<br />
• ΟΙΚΕΙΑΚΑ ΖΩΑ<br />
• ΑΓΡΙΑ ΖΩΑ<br />
• ΦΩΚΙΕΣ
Μ. PINIPEDII
Μ. PINIPEDII
M. Dassie
Μ. MICROTI
M. CAPRAE
M. BOVIS
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS<br />
COMPLEX<br />
• 4.411.522 bp<br />
•G+C 65.5%<br />
• 3924 ΕΙΔΗ<br />
ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ<br />
• ΑΥΤΟΔΥΝΑΜΟ<br />
ΜΙΚΡΟΒΙΟ
ΛΙΠΙΔΙΑ ΤΟΥ ΕΞΩΤΕΡΙΚΟΥ ΤΟΙΧΩΜΑΤΟΣ<br />
ΤΟΥ ΜTBC ( 1LPS)
• 1LPS:<br />
• Free Fatty acids<br />
• Mycolic acid<br />
• Arabinogalactan<br />
• Peptidoglycan<br />
ΛΙΠΙΔΙΑ ΤΟΥ ΤΟΙΧΩΜΑΤΟΣ<br />
ΤΟΥ ΜTBC ( 2LPS)<br />
• Lipoarabinomannan( 2LPS)<br />
• Sulfatides<br />
• Cord Factor (6,6-dimycolyl-α,α-D-trehalose)<br />
• Mycosides ( Bacteriphage receptors sites)
ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΑΝΤΙΓΟΝΑ ΤΟΥ ΜΤΒC
ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ- ΑΝΤΙΓΟΝΑ ΤΟΥ ΜΤΒC<br />
ME ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΑΞΙΑ<br />
• ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ- ΑΝΤΙΓΟΝΑ ΤΟΥ RD1 ΜΤΒC<br />
• ESAT-6<br />
• CFP-10<br />
• MPT-64<br />
• Μ.TUBERCULOSIS<br />
• M.KANSASI<br />
• M.MARINUM<br />
• M.FLAVESCENS<br />
• M.SZULGAI<br />
• ΟΡΟΔΙΓΝΩΣΤΙΚΑ ΑΝΤΙΓΟΝΑ:<br />
• 38 KDa antigen<br />
• Lipoarabinomannan<br />
• Antigen 60<br />
• Antigen 80<br />
• Elisa, Radioimmunoassay etc
ΛΑΝΘΑΝΟΥΣΑ ΦΥΜΑΤΙΩΣΗ<br />
ΔΙΑΓΝΩΣΗ
ΦΥΜΑΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ<br />
• Μantoux test<br />
• Heaf test<br />
• MEIONEKTHMATA<br />
• 200 αντιγόνα πολλά είναι κοινά με τα<br />
άτυπα<br />
• Αναμνηστική έξέταση<br />
• Δεν διαχωρίζει την λοίμωξη από το BCG
MANTOUX TEST
ΗΕAF TEST<br />
• ΑΡΝΗΤΙΚΟ HEAF TEST • ΘΕΤΙΚΟ HEAF TEST
IFN-γ Assays<br />
• Quantiferon-TB Gold<br />
• Elisspot assay
ΥΛΙΚΑ ΓΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗ<br />
• Πτύελα<br />
• Προκλητά πτύελα<br />
• Βρογχοσκοπικό υλικό<br />
• Γαστρικό υγρό<br />
• Ούρα<br />
• Κόπρανα;<br />
•Aίμα- μυελός<br />
• Βιολογικά υγρά
ΒΙΟΛΟΓΙΚΑ ΥΓΡΑ ΕΚΤΟΣ ΑΠΟ<br />
• Εγκεφαλονωτιαίο υγρό<br />
• Πλευριτικό υγρό<br />
• Περικαρδιακό υγρό<br />
• Ασκητικό υγρό<br />
ΑΙΜΑ<br />
• Tο Βιολογικό υλικό.Β Υ ενίετε στο Θρεπτικό υλικό Θ Υ<br />
σε αναλογία :1ml :4-5 ml<br />
• Θρεπτικά υλικά είναι τα εξης:<br />
• 7Η9 Broth<br />
• 7H12 σε 12Β ΒACTEC vial (1ml :4ml 7H12 )<br />
• 7H13-13A BACTEC (5ml :20 ml 7H13)
MIKΡΟΒΙΟΛΟΓΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ<br />
• Απλή χρώση:<br />
• Carbol fuschin( ΖΙΕΗL-ΝΕΕLSEN)<br />
• Kinyoun<br />
• Aπαιτούνται 10.000 βάκιλοι/ml<br />
• Συνολικός χρόνος εξέτασης 15-30 min<br />
• 100 οπτικά πεδία αναλογούν στο 1% του δείγματος<br />
5000 βακ/ml πρέπει να ελεγχθούν 200 οπ για να εντοπισθή ένας βάκιλος<br />
• Φθοριοχρωστικές<br />
Auramine-rhodamine<br />
Μεγαλύτερη ευαισθησία, μικρότερος χρόνος εξέτασης 3 min<br />
Eπιβεβαίωση με ΖΙΕΗL-ΝΕΕLSEN
ΧΡΩΣΗ ZIEL-NEELSEN
XΡΩΣΗ Αuramine-rhodamine
ΚΑΛΙΕΡΓΕΙΑ ΤΟΥ ΜΤΒC<br />
• Σε θρεπτικά υλικά από αυγό<br />
• Σε θρεπτικά υλικά από άγαρ<br />
• Σε υγρά θρεπτικά υλικά
ΚΑΛΙΕΡΓΕΙΑ ΤΟΥ ΜΤΒC*<br />
• ΣΥΜΒΑΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ (Σ.Θ.Υ)<br />
• L-J (4-6 εβδομ)<br />
• Agar Middlebrook 7H10,7H11(2-4 εβδομ)<br />
• ΜΗ ΣΥΜΒΑΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ( Υ.Θ.Υ)<br />
• Βactec 460 Ραδιομετρική μεθ (12-21 ημ)<br />
• Μη ραδιμετρικές μέθοδοι(12-21 ημ)<br />
MGIT,ESP II,Bactec 9000 MB System,<br />
MB-BacT Mycobacteria Detection System<br />
• * (10-100 βάκιλοι/ml υλικού)
KAΛΙΕΡΓΕΙΑ LOWENSTEIN-JENSEN
KAΛΙΕΡΓΕΙΑ ΣΕ ΑΓΑΡ
ΡΑΔΙΟΜΕΤΡΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΣ<br />
• BD BACTEC bottles<br />
containing<br />
• Middlebrook 7H12<br />
media prior to<br />
• inoculation.<br />
• Figure 2. BD<br />
BACTEC machine.
Mycobacteria Growth Indicator Tube
ΑΛΛΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ<br />
• Η ΜΗ ΙΣΟΤΟΠΙΚΗ ΔΙΦΑΣΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΣ<br />
• ΑΙΜΟΚΑΛΙΕΡΓΕΙΑ ΓΙΑ ΜΥΚΟΒΑΚΤΗΡΙΑ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ<br />
•EΠΙΔΗΜΙΟΛΟΓΙΑ<br />
(RFLP,MIRUS,SPOLIGOTYPING)<br />
• ΔΙΑΓΝΩΣΗ<br />
• ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ<br />
• ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ<br />
• ΑΜPLICOR( DNA,Roche Diagnosis System)<br />
Eυαισθ 74-92%sm(+),40-73% sm(-)<br />
• E-MDT(Rrna, Gen-probe, Inc)<br />
Eυαισθ :83-98% sm(+),70-81% sm(-)<br />
• Εξειδ 98-99%<br />
• 1-10 Βάκιλοι για την εξέταση<br />
• m RNA (ζωντανοί Βάκιλοι)
CDC ΣΥΣΤΑΣΕΙΣ ΓΙΑ ΤΙΣ ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ(ΜΤ)<br />
MMWR 2000;49 (26):593-4<br />
1)To πρώτο δείγμα θετικό στη χρώση και στη μτ(E-MTD) και η κλινική πιθανότητα<br />
είναι μετρίου η υψηλού βαθμού Τότε θεωρείται ότι ο ασθενής πάσχει από<br />
φυματίωση.<br />
2) To πρώτο δείγμα θετικό στη μτ(E-MTD)και αρνητικό στη χρώση και και η<br />
κλινική πιθανότητα είναι μετρίου η υψηλού βαθμού ο ασθενής θεωρείται οτι<br />
πάσχει από φυματίωση<br />
3) Εάν το πρώτο δείγμα είναι αρνητικό στη χρώση και θετικό στη (Ε-MTD) και<br />
η κλινική πιθανότητα είναι χαμήλου βαθμού η εξέταση επαναλαμβάνεται<br />
4) Όταν η χρώση είναι επανειλημμένα θετική και η μτ αρνητική και έχει αποκλεισθεί<br />
η πιθανότητα αναστολέων της μτ στα πτύελα . Τότε Η νόσος οφείλεται σε<br />
άτυπα μυκοβακτήρια<br />
5) Εάν το πρώτο δείγμα είναι αρνητικό και στις δύο τεχνικές και η κλινική<br />
πιθανότητα είναι μετρίου η υψηλού βαθμού η έξέταση επαναλαμβάνεται<br />
Εάν η δευτερή E-MDT είναι θετική ο ασθενής θεωρείται οτι πάσχει από<br />
φυματίωση<br />
Εάν είναι αρνητική και η κλινική πιθανότητα είναι μικρού βαθμού τότε<br />
θεωρείται ότι δεν πάσχει από φυματίωση<br />
6) Εάν η κλινική πιθανότητα είναι μετρίου η υψηλού βαθμού και τα δύο<br />
δείγματα είναι αρνητικά κρίνεται σκόπιμη και Τρίτη εξέταση
ΟΙ ΜΤ ΣΤΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΤΗΣ ΜΗ ΠΝΕΥΜΟΝΙΚΗΣ<br />
ΦΥΜΑΤΙΩΣΗΣ<br />
• E-MTD, AMPLICOR<br />
Συνολική ευαισθ: 67-100%<br />
Εξειδίκευση: 100%<br />
• Στο ΕΝΥ η ευαισθησία είναι πιο μεγάλη<br />
από το πλευριτικό υγρό
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΓΙΑ ΤΟΝ ΕΛΕΓΧΟ ΤΗΣ<br />
ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ<br />
• α)PCR:1)(INNO-LiPA MYCOBACTERIA v2)<br />
2)(INNO-LiPA MYCOBACTERIARif TB)<br />
β)Μοριακοί “Φάροι”
ΜHXANIΣΜΟΙ ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ<br />
ΤΟΥ MTBC
MOΡΙΑΚΟΙ ΦΑΡΟΙ
MOΡΙΑΚΟΙ ΦΑΡΟΙ
ΤΑΧΕΙΕΣ ΜΗ- ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΓΙΑ ΤΗΝ<br />
ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΤΗΣ ΦΥΜΑΤΙΩΣΗΣ<br />
•Bακτηριοφάγοι απλοί η με Luciferase:<br />
FASTIPlaqueTB<br />
FASTIPlaqueTB-ΜDR<br />
FASTIPlaqueTB-RIF
ΒΑΚΤΗΡΙΟΦΑΓΟΙ
ΒΑΚΤΗΡΙΟΦΑΓΟΙ
ΒΑΚΤΗΡΙΟΦΑΓΟΙ-LUCIFARASE
Η ΚΑΤΑΣΤΑΣΗ ΣΤΟ ΝΝΘΑ<br />
ΣΤΑΘΕΡΟΙ ΣΤΗΝ ΠΑΡΑΔΟΣΗ<br />
• ΜΕΘΟΔΟΙ ΤΟΥ 1960<br />
• ΜΕΣΟΣ ΧΡΟΝΟΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ ΣΤΑ<br />
ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ 3 ΜΗΝΕΣ Η 90 ΗΜΕΡΕΣ<br />
• ΜΕΣΟΣ ΧΡΟΝΟΣ ΓΙΑ ΚΑΛΙΕΡΓΕΙΑ 2 ΜΗΝΕΣ
ΤΕΛΟΣ<br />
Ν .Χ. ΠΟΥΛΑΚΗΣ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ<br />
ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ ΦΑΡΜΑΚΑ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ<br />
ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ ΦΑΡΜΑΚΑ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ<br />
ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ ΦΑΡΜΑΚΑ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ<br />
ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ ΦΑΡΜΑΚΑ
ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ<br />
• ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ<br />
• ΥΓΡΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ (MODS)<br />
•BAKΤΗΡΙΟΦΑΓΟΙ
Change language