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foram moídas e misturadas; de cada amostra foi retirada uma alíquota de 0,5 g pesada em
balança digital de alta precisão. As extrações foram realizadas no Laboratório do
Departamento de Produção Vegetal, Setor Horticultura da Faculdade de Ciências
Agronômicas (FCA)- Botucatu, SP.
5.8.2. Concentração do extrato
O extrato foi concentrado, no próprio balão de extração, em rotaevaporador
a 40˚C. As amostras foram então acondicionadas em vidros âmbar previamente
pesados, e então secas até total retirada do solvente (metanol). Os vidros com as amostras
foram pesados para determinação da massa do extrato por diferença de peso e armazenados em
freezer para posterior análise.
5.8.3. Preparo da solução de MeOH:H2O (2:3) para diluição do extrato
Para a diluição dos extratos preparou-se uma solução hidroalcoolica de
metanol (MeOH:H2O) na proporção 2:3, para 1L da solução utilizou-se 400ml de MeOH grau
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC) e 600 ml de H2O deionizada. A solução foi
filtrada em um sistema de filtração a vácuo com membrana de 0,5 µm.
5.8.4. Calibração da curva padrão
A curva padrão foi calibrada no cromatógrafo com solução padrão de ß
-ecdisona, solubilizado em metanol grau HPLC nas concentrações 50, 100 e 200 ug/ml. Cada
solução foi injetada duas vezes no HPLC.