FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRONÔMICAS CAMPUS DE ...

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de magnésio (1 g), cloreto de sódio (0,001 g), carboximetilcelulose (CMC) (10 g) e ágar (15 g).
Os reagentes foram diluídos em água destilada e autovaclados 121ºC, por 20 minutos.
Sendo um substrato para endoglucanases, a CMC pode ser usada para a
detecção da atividade das enzimas celulolíticas endoglucanase e ß-glucosidases. Para a avaliação,
adicionaram-se nas placas colonizadas 5 mL de vermelho do congo (2%), aguardando-se 15
minutos. Após, descartou-se a solução, e em seguida, depositou-se 5 mL de NaCl (1N) na
superfície das mesmas, aguardando-se novamente 15 minutos.
A degradação do CMC é detectada através da presença de uma área
amarelo-opaco, ao redor das colônias miceliais, destacando-se contra a região vermelha do meio
de cultura devido à presença de CMC intacta (POITING, 1999).
4.3.6. Lipase
A metodologia utilizada para o preparo de meio de detecção de produção
de lipases foi de acordo com Souza (2007) e Hankin e Anagnostakis (1975). Os reagentes
utilizados para o preparo de um litro de meio de cultura foram: Polissorbato (Tween-20) (5 mL),
peptona (5 g), cloreto de sódio (5 g); cloreto de cálcio (0,010 g), gelatina (40 g) e ágar (20 g). O
Polissorbato foi medido com auxílio de pipeta separadamente dos demais reagentes (solução A),
os quais foram solubilizados (solução B). As soluções foram autoclavadas a 121ºC, 20 minutos.
No momento de verter o meio de cultura nas placas de Petri, adicionou-se a solução A junto à
solução B, sendo homogeneizados e vertidos nas placas.
Ao produzir lipase, o Polissorbato é degradado a ácidos graxos e, desta
forma, há a liberação de sais de cálcio no meio (PLOU et al., 1998). Esses cristais são
evidenciados pela formação de halo claro ao redor das colônias miceliais. Nesta situação, a
presença do halo evidência reação positiva.