FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRONÔMICAS CAMPUS DE ...

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g) e ágar (15 g). A gelatina foi diluída em 250 mL de água destilada (solução A), separadamente
dos demais reagentes, cuja solução aquosa teve o pH ajustado para 6,0 (solução B). As soluções
A e B foram autoclavadas separadamente (121 ºC, 20 minutos). No momento de verter o meio de
cultura nas placas de Petri, adicionou-se a solução A junto à solução B, sendo homogeneizados
vertidos nas placas.
A degradação da gelatina foi avaliada pela visualização de um halo mais
claro ao redor da colônia em crescimento.
4.3.3. Pectinase 5
A metodologia para o preparo de meio de detecção de produção de
pectinases foi de acordo Hankin e Anagnostakis (1975). Os reagentes utilizados para o preparo de
um litro de meio de cultura foram: extrato de levedura (2 g), pectina cítrica (10 g) e ágar (15 g),
ajustando-se o pH para 5,0. Os reagentes foram adicionados em água destilada e autoclavados a
121ºC por 20 minutos.
Neste pH é possível detectar a atividade da enzima pectato liase. Para a
avaliação, cobriu-se o meio de cultura com uma solução aquosa de brometo de hexadecil trimetil
amônio (1%). Este reagente precipita a pectina intacta no meio, gerando uma zona mais clara ao
redor da colônia micelial, onde a pectina foi consumida, indicando reação positiva.
4.3.4. Pectinase 7
O meio de cultura utilizado bem como o procedimento de avaliação de
atividade desta enzima, pectinase 7, foram os mesmos descritos para a enzima pectina 5 (Item
5.6.3). A única diferença foi o pH, agora ajustado para 7.0, condição necessária para se detectar a
produção da enzima pectina polimerase (HANKIN e ANAGNOSTAKIS, 1975). Os reagentes
foram adicionados de água destilada a autoclavados a 121ºC, por 20 minutos.
4.3.5. Celulase
A metodologia para o preparo de meio de detecção de produção de
celulase foi de acordo com Santos (2007) e Poiting (1999), sendo os reagentes utilizados para o
preparo de um litro de meio de cultura: sulfato de amônio (1 g), fosfato de potássio (1 g), sulfato