FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRONÔMICAS CAMPUS DE ...

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4.3. EXPERIMENTO 3 – ATIVIDADE ENZIMÁTICA DOS FUNGOS
Os fungos P. sanguineus (Jaú-30), L. bertieri, Xylaria sp., L. edodes (Led
98/47) e S. ostrea, foram avaliados quanto à produção de enzimas que degradam a parede celular
vegetal, sejam elas as lacases, proteases, pectinases, celulases e lipases. Essas enzimas são
detectadas em meios de cultivos sólidos específicos.
A inoculação dos meios foi feita com discos de meio BDA, contendo
micélio dos fungos (φ 5 mm, cinco dias de crescimento a 25ºC), após, as placas de Petri foram
incubadas em B.O.D, no escuro a 25ºC, por sete dias. O comportamento dos fungos foi avaliado
conforme a presença de halo (reação positiva), ou sem a formação de halo (reação negativa) ao
redor do micélio em crescimento. O delineamento foi casualizado, em duplicata.
Para cada meio de cultivo específico, quando necessário, ajustou-se o pH
dos meios com uma solução de NaOH 1N.
4.3.1. Lacase
A metodologia utilizada para o preparo de meio de cultura de detecção de
produção de enzimas oxidativas, em especial a lacase, foi de acordo com Conceição et al. (2005)
e Poiting (1999). Os reagentes utilizados para o preparo de um litro de meio de cultura foram:
ácido gálico (0,5 g), extrato de malte (15 g), peptona (1 g) e ágar (20 g). Este meio de cultura
deve ser preparado separadamente, sendo o ácido gálico homogeneizado em 50 mL de água
destilada (solução A). Os demais reagentes foram solubilizados em água destilada, o pH ajustado
para 7,0 (solução B). As soluções A e B foram autoclavadas separadamente (121ºC, 20 minutos).
No momento de verter o meio de cultura nas placas de Petri, adicionou-se a solução A junto à
solução B, sendo homogeneizados e vertidos nas placas.
A avaliação foi feita pela visualização de um halo de coloração âmbar ao
redor da colônia micelial em crescimento.
4.3.2. Protease
A metodologia utilizada para o preparo de meio de cultura de detecção de
proteases foi de acordo com Hankin e Anagnostakis (1975). Os reagentes utilizados para o
preparo de um litro de meio de cultura foram: extrato de carne (3 g); peptona (5 g), gelatina (40