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33 A B C Figura 5: Avaliação do crescimento micelial em meios de cultura. A: Placa de Petri fechada. B: Disco de meio de cultura contendo micélio fúngico, depositado no centro da placa, com duas linhas perpendiculares entre si, marcadas no fundo da placa de Petri. C: Acompanhamento do crescimento micelial em meio de cultura.
34 4.3. EXPERIMENTO 3 – ATIVIDA<strong>DE</strong> ENZIMÁTICA DOS FUNGOS Os fungos P. sanguineus (Jaú-30), L. bertieri, Xylaria sp., L. edodes (Led 98/47) e S. ostrea, foram avaliados quanto à produção de enzimas que degradam a parede celular vegetal, sejam elas as lacases, proteases, pectinases, celulases e lipases. Essas enzimas são detectadas em meios de cultivos sólidos específicos. A inoculação dos meios foi feita com discos de meio BDA, contendo micélio dos fungos (φ 5 mm, cinco dias de crescimento a 25ºC), após, as placas de Petri foram incubadas em B.O.D, no escuro a 25ºC, por sete dias. O comportamento dos fungos foi avaliado conforme a presença de halo (reação positiva), ou sem a formação de halo (reação negativa) ao redor do micélio em crescimento. O delineamento foi casualizado, em duplicata. Para cada meio de cultivo específico, quando necessário, ajustou-se o pH dos meios com uma solução de NaOH 1N. 4.3.1. Lacase A metodologia utilizada para o preparo de meio de cultura de detecção de produção de enzimas oxidativas, em especial a lacase, foi de acordo com Conceição et al. (2005) e Poiting (1999). Os reagentes utilizados para o preparo de um litro de meio de cultura foram: ácido gálico (0,5 g), extrato de malte (15 g), peptona (1 g) e ágar (20 g). Este meio de cultura deve ser preparado separadamente, sendo o ácido gálico homogeneizado em 50 mL de água destilada (solução A). Os demais reagentes foram solubilizados em água destilada, o pH ajustado para 7,0 (solução B). As soluções A e B foram autoclavadas separadamente (121ºC, 20 minutos). No momento de verter o meio de cultura nas placas de Petri, adicionou-se a solução A junto à solução B, sendo homogeneizados e vertidos nas placas. A avaliação foi feita pela visualização de um halo de coloração âmbar ao redor da colônia micelial em crescimento. 4.3.2. Protease A metodologia utilizada para o preparo de meio de cultura de detecção de proteases foi de acordo com Hankin e Anagnostakis (1975). Os reagentes utilizados para o preparo de um litro de meio de cultura foram: extrato de carne (3 g); peptona (5 g), gelatina (40
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