CARACTERIZAÇÃO DO MECANISMO FOTOSSINTÉTICO E

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O equipamento espectrômetro de massas ioniza moléculas gasosas e
separa os feixes de íons em um espectro de massas de acordo com a relação massa/carga
(q/m), utilizando campo elétrico e magnético. As abundâncias relativas (concentrações) das
moléculas isotópicas de diferentes massa/carga são determinadas pelas medidas das correntes
elétricas geradas por estes feixes iônicos separados (CRISS, 1999; EHLERINGER et al.,
2000).
Os estudos de anatomia foliar/testes histoquímicos foram realizados
em cooperação com o Departamento de Biologia Vegetal da Universidade Federal de Viçosa,
MG.
Porções da região mediana de folhas de A. annua foram fixadas em
FAA 50 e armazenadas em etanol 70% (JOHANSEN, 1940). As amostras foram desidratadas
em série etílica progressiva e embebidas em glicol-metacrilato (Historesin-Leica®) de acordo
com as recomendações do fabricante (GERRITS, 1991). O material emblocado foi seccionado
transversalmente em micrótomo rotativo com 8µm de espessura e corado com azul de
toluidina (O’BRIEN et al., 1964; RUZIN, 1999) para metacromasia. Para a análise de
proteínas, os cortes foram corados com Xylidine Ponceau (XP) pH 2,5 (VIDAL, 1977), onde a
coloração vermelha indica a presença de enzimas, como a ribulose-1,5-bifosfato
carboxilase/oxigenase (RUBISCO), presente nos cloroplastos. Mais de 50% do nitrogênio
presente nas plantas herbáceas encontra-se na maquinaria fotossintética e deste total a maior
parte é contituinte da enzima RUBISCO (CHAPMAN & BARRETO, 1997; DIETZ &
HARRIS, 1997; LAMBERS et al., 1998).
Para a detecção de polissacarídeos, incluindo amido, o material foi
submetido ao ácido periódico/reagente de Schiff (PAS) (PEARSE, 1968; O’BRIEN &
MCCULLY, 1981). Este teste baseia-se na oxidação, pela ação do ácido periódico, dos grupos
1,2-gicol dos resíduos de glicose constituintes das macromoléculas glicídicas. Para cada
resíduo de glicose formam-se duas funções aldeído, em conseqüência da quebra da ligação
entre os carbonos portadores de radicais –OH. Os grupos carbonilos assim formados dão
origem, em presença do reagente de Schiff, a um produto de condensação magenta. Todas as
lâminas foram montadas com resina sintética (Permount®) e lamínula, para observação em
microscópio de luz.