CARACTERIZAÃÃO DO MECANISMO FOTOSSINTÃTICO E
CARACTERIZAÃÃO DO MECANISMO FOTOSSINTÃTICO E CARACTERIZAÃÃO DO MECANISMO FOTOSSINTÃTICO E
20 (δ‰ 13 C) é a medida da razão 13 C/ 12 C em uma amostra de planta dividida pela medida da razão 13 C/ 12 C padrão PDB. Desta forma, δ‰ 13 C = [(R p /R s ) – 1] x 1000 onde R p é a razão do isótopo pesado sobre o leve ( 13 C/ 12 C) mensurada na amostra vegetal e R s é a razão do padrão (PDB). O padrão internacional utilizado é o fóssil belemnite da formação calcária Pee Dee (PDB) na Carolina do Sul/EUA. Como os valores numéricos das diferenças são pequenas, costuma-se multiplicar a expressão por 1000, obtendo-se a terminologia em delta per mil (δ‰). Amostras de material vegetal contemporâneo apresentam valores negativos de δ‰ 13 C porque a razão 13 C/ 12 C na atmosfera é menor do que o padrão internacional Pee Dee belemnite (PDB), além de também ocorrer discriminação contra 13 C pelas plantas durante os processos de absorção e fixação de CO 2 na fotossíntese (O’LEARY et al., 1992; O’LEARY, 1993; CONDON et al., 2002; DAWSON et al., 2002). A B C Figura 5. Folhas secas de A. annua sendo moídas em moinho criogênico a -196 0 C (A); adição de amostras finamente moídas em cápsulas de estanho (B); espectrômetro de massas acoplado a um analisador elemental (C).
21 O equipamento espectrômetro de massas ioniza moléculas gasosas e separa os feixes de íons em um espectro de massas de acordo com a relação massa/carga (q/m), utilizando campo elétrico e magnético. As abundâncias relativas (concentrações) das moléculas isotópicas de diferentes massa/carga são determinadas pelas medidas das correntes elétricas geradas por estes feixes iônicos separados (CRISS, 1999; EHLERINGER et al., 2000). Os estudos de anatomia foliar/testes histoquímicos foram realizados em cooperação com o Departamento de Biologia Vegetal da Universidade Federal de Viçosa, MG. Porções da região mediana de folhas de A. annua foram fixadas em FAA 50 e armazenadas em etanol 70% (JOHANSEN, 1940). As amostras foram desidratadas em série etílica progressiva e embebidas em glicol-metacrilato (Historesin-Leica®) de acordo com as recomendações do fabricante (GERRITS, 1991). O material emblocado foi seccionado transversalmente em micrótomo rotativo com 8µm de espessura e corado com azul de toluidina (O’BRIEN et al., 1964; RUZIN, 1999) para metacromasia. Para a análise de proteínas, os cortes foram corados com Xylidine Ponceau (XP) pH 2,5 (VIDAL, 1977), onde a coloração vermelha indica a presença de enzimas, como a ribulose-1,5-bifosfato carboxilase/oxigenase (RUBISCO), presente nos cloroplastos. Mais de 50% do nitrogênio presente nas plantas herbáceas encontra-se na maquinaria fotossintética e deste total a maior parte é contituinte da enzima RUBISCO (CHAPMAN & BARRETO, 1997; DIETZ & HARRIS, 1997; LAMBERS et al., 1998). Para a detecção de polissacarídeos, incluindo amido, o material foi submetido ao ácido periódico/reagente de Schiff (PAS) (PEARSE, 1968; O’BRIEN & MCCULLY, 1981). Este teste baseia-se na oxidação, pela ação do ácido periódico, dos grupos 1,2-gicol dos resíduos de glicose constituintes das macromoléculas glicídicas. Para cada resíduo de glicose formam-se duas funções aldeído, em conseqüência da quebra da ligação entre os carbonos portadores de radicais –OH. Os grupos carbonilos assim formados dão origem, em presença do reagente de Schiff, a um produto de condensação magenta. Todas as lâminas foram montadas com resina sintética (Permount®) e lamínula, para observação em microscópio de luz.
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onde R p é a razão do isótopo pesado sobre o leve ( 13 C/ 12 C) mensurada na amostra vegetal e R s<br />
é a razão do padrão (PDB). O padrão internacional utilizado é o fóssil belemnite da formação<br />
calcária Pee Dee (PDB) na Carolina do Sul/EUA. Como os valores numéricos das diferenças<br />
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delta per mil (δ‰). Amostras de material vegetal contemporâneo apresentam valores<br />
negativos de δ‰ 13 C porque a razão 13 C/ 12 C na atmosfera é menor do que o padrão<br />
internacional Pee Dee belemnite (PDB), além de também ocorrer discriminação contra 13 C<br />
pelas plantas durante os processos de absorção e fixação de CO 2 na fotossíntese (O’LEARY et<br />
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a um analisador elemental (C).