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V Congresso Brasileiro de Mamona / II Simpósio Internacional de Oleaginosas Energéticas & I Fórum Capixaba de Pinhão Manso, Guarapari (ES) – 2012 CONSTRUÇÃO DE BIBLIOTECAS SUBTRATIVA DE cDNA DE MAMONA ASSOCIADOS AO ESTRESSE HÍDRICO João Gabriel de Medeiros Farias. 1 ; Paulo Fernandes da Costa Neto 2 . ; Sara Caroline Pinto de Almeida. 3 ; Kátia Castanho Scortecci. 4 1. Mestrando no Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas - UFRN– jgmfarias@gmail.com; 2. Iniciação científica CNPq, graduando em Ciências Biológicas – paulofernandes_rnsp@hotmail.com; 3. Mestranda no Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas – UFRN– otaciliacarol@gmail.com; 4. Doutora em Botânica, Professora da UFRN - kacscort@yahoo.com RESUMO – A Mamona (Ricinus communis L.) vem sendo usada como principal fonte de matéria prima para diversos processos industriais e promissora para a produção de biodiesel. Além do que, essa planta mostra grande adaptabilidade em diversos estados brasileiros, sendo uma alternativa de cultivo em regiões com altos níveis de temperatura e seca, devida sua resistência a esses tipos de estresse. Objetivamos no presente estudo a construção de bibliotecas subtratvas a partir do material submetido ao estresse hídrico. Para tanto, selecionamos a cultivar BRS Energia e submetemos ao tratamento de estresse hídrico com 5, 10, 15 e 10 dias cíclico (10 dias de estresse + 10 dias de rega). As amostras de fruto, folhas e raízes das plantas tratadas e controle foram isoladas e congeladas em nitrogênio líquido, com posterior armazenamento em freezer a -80ºc. Para a construção das bibliotecas subtrativas foi realizado a extração do RNA total de sementes com o RNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN). Na construção das bibliotecas subtrativas de cDNA utilizou-se o Super SMART PCR cDNA Synthesis Kit e o PCR-Select cDNA Subtraction Kit (Clontech). Os fragmentos obtidos da biblioteca subtrativa foram clonados no vetor pGEM-Teasy (Promega) e posteriormente inseridos em bactérias E. coli DH10B competentes, por eletroporação. Com as colônias isoladas foi realizado protocolo de miniprep alcalina, com o DNA plasmidial obtido que foi digerido com a enzima de restrição EcoRI, e revelou fragmentos de tamanhos variados de inserto de 300 a 600 bp. Os produtos do sequenciamento foram identificados pelo BLASTX 2.2.26. Como resultado nas bibliotecas de cDNA de sementes, obteve-se 444 sequências para plantas do tratamento com 10 dias, onde 49% delas representavam proteínas desconhecidas ou hipotéticas, 4% apresentavam relações com atividades ribossomais, 3% com atividades antioxidantes, 1% promovia proteção ao estresse, 16 % estavam envolvidos com transporte de elétrons ou formação de moléculas energéticas, 2% em sinalização, 3% em regulação, 9% estavam envolvidos com acúmulo de óleo e armazenagem em sementes, 1% atuavam com diversas polimerases, 3% como fatores de transcrição e 8% estavam distribuídos em metabolismos diversos. Em relação às plantas controle, foram obtidas 366 sequências, das quais 55% eram desconhecidas ou hipotéticas, 1% apresentava atividade antioxidante, 28% estavam associadas com a formação de moléculas energéticas, 6% atuavam na proteção contra estresse provenientes de patógenos, 6% atuavam em metabolismos diversos e 3% estavam envolvidos com acúmulo de óleo e armazenagem em sementes e 20% atuavam diversos metabolismos. Com os presentes números, percebemos o grande volume de proteínas ainda desconhecidas, porém, categorias presentes como atividade antioxidante e proteção ao estresse, revelam importantes proteínas relacionadas à nossa biblioteca. Palavras-chave: Estresse Hídrico, Melhoramento Genético, Ricinuscommunis L., Apoio: Auxílio Financeiro – CNPq, BNB. CONGRESSO BRASILEIRO DE MAMONA, 5 ; SIMPÓSIO INTERNACIONAL DE OLEAGINOSAS ENERGÉTICAS, 2 & I FÓRUM CAPIXABA DE PINHÃO MANSO, 2012, Guarapari. Desafios e Oportunidades: Anais... Campina grande: Embrapa Algodão, 2012. p. 362.
V Congresso Brasileiro de Mamona / II Simpósio Internacional de Oleaginosas Energéticas & I Fórum Capixaba de Pinhão Manso, Guarapari (ES) – 2012 CONTRIBUIÇÃO RELATIVA DAS ORDENS PRIMÁRIA, SECUNDÁRIA E TERCIÁRIA DE GENÓTIPOS DE MAMONEIRA DE PORTE BAIXO EM IRECÊ-BA Jalmi Guedes Freitas¹; Jocelmo Ribeiro Mota 2 ; Gilvando Almeida da Silva 3 ; Sabrina Oliveira Dourado 4 ; Francielle de Souza Silva 4 ; João Mendes da Silva 4 e Cristianne Félix Leonel da Silva 4 1. Analista da Embrapa Algodão, Mestre em Fitotecnia – jalmi@cnpa.embrapa.br; 2. e 3. Técnicos da Embrapa Algodão; 4. Estagiário da Embrapa Algodão e estudante do CETEP (Centro Territorial de Educação Profissional de Irecê) RESUMO - As ordens dos racemos das plantas de mamoneira contribuem de forma diferente para com a produção, sendo as primeiras ordens maiores e mais produtivas quando as condições climáticas são favoráveis. Objetivou-se avaliar a contribuição dos racemos primário, secundário e terciário das linhagens avançadas de mamoneira de porte baixo do programa de melhoramento genético da Embrapa Algodão. Foram avaliados nove materiais genéticos de mamoneira, sendo cinco linhagens avançadas pertencentes ao programa de melhoramento genético da Embrapa Algodão: CNPAM 2001-48, CNPAM 2001-50, CNPAM 2001-57, CNPAM 2000-49, CNPAM 2000-7 e quatro cultivares em uso: BRS Energia, BRS Gabriela, IAC Guaranye IAC 226. Avaliou-se o rendimento e a contribuição dos racemos primário, secundário e terciário na produtividade final de cada genótipo. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso com nove tratamentos, três repetições e parcela constituída de quatro fileiras de cinco metros, sendo consideradas como área útil as duas fileiras centrais. Os racemos foram coletados separadamente em cada parcela do ensaio de pesquisa de porte baixo instalado no CETEP (Centro Territorial de Educação Profissional) em Irecê – BA no ano de 2010 e nas coordenadas geográficas: latitude 11º19’ 8,92” e longitude: 41º 49’ 50,58” com altitude de aproximadamente de 769m e clima semiárido. A produtividade de cada ordem foi obtida pela coleta dos racemos provenientes da área útil das parcelas desse experimento. Para isso, os racemos de primeira, segunda e terceira ordem foram coletados e processados separadamente. Constatou-se que a contribuição conjunta das três ordens dos genótipos avaliados variou de 39,47% na cultivar BRS Gabriela a 100% na cultivar IAC 226 e; as cultivares BRS Energia e IAC Guarany apresentaram contribuições decrescentes por ordem de racemos, sendo o racemo primário responsável pela maior contribuição para a produtividade, porém, não se verificou diferença entre as ordens pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Palavras-chave: Mamona, linhagens, ordem floral e produção Apoio: Embrapa Algodão CONGRESSO BRASILEIRO DE MAMONA, 5 ; SIMPÓSIO INTERNACIONAL DE OLEAGINOSAS ENERGÉTICAS, 2 & I FÓRUM CAPIXABA DE PINHÃO MANSO, 2012, Guarapari. Desafios e Oportunidades: Anais... Campina grande: Embrapa Algodão, 2012. p. 363.
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