MARCIA MARZAGÃO RIBEIRO INFLUÊNCIA DA ADUBAÇÃO ...

o hidróxido de sódio 32%. Após a destilação, a amostra foi titulada com ácido
sulfúrico 0,02 mol L -1 .
Quando aplicados o procedimento analítico em erva-mate foram observadas
na digestão e na destilação a formação de espuma abundante e ajustou-se a
metodologia para que não ocorressem perdas dos minerais. O ajuste foi efetuado
iniciando-se a digestão com temperatura de 40°C para que a amostra não espuma-se e
escorre-se no tubo do bloco digestor. O aumento da temperatura ficou em função do
aumento da espuma, portanto, quando a amostra começava a espumar retornava-se a
temperatura anterior totalizando em torno de 14 horas de digestão.
4.4.2 Análise de aminoácido
Esta análise foi procedida no Laboratório de Análise de Plantas da
Universidade Christian Albrechts em Kiel na Alemanha.
Foi utilizado o método de LOHAUS, G. et al.. (2000) para a análise de
aminoácidos livres. Para o procedimento o extrato foi preparado com 100 g de folha
seca e moída, adicionando-se 05 mL de metanol/clorofórmio, na proporção de 3,5
ml/1,5 ml respectivamente. Efetuou-se um banho de gelo por 30 minutos, adicionou-se
em seguida 03 mL de água bidestilada e colocou-se na centrífuga por 10 minutos, a 04
°C e 3800 rpm. Retirou-se da centrifuga e com auxílio de uma pipeta transferiu-se
apenas a fase líquida para um balão de 50 mL; Adicionou-se mais 03 mL de água e
colocou-se na centrifuga novamente. Retirou-se novamente a fase liquida e descartou-
se a fase sólida. Levou-se o balão ao destilador e adicionou-se 10 ao invés de 04 gotas
de octanol conforme a utilizada na metodologia. Colocou-se 02 mL de água e
transferiu-se para tubo plástico com tampa para estocar no freezer a -20 °C. Para a
etapa seguinte chamada de purificação, a amostra foi passada pela coluna C18 .
Os teores de aminoácidos medidos no “aminoacid analyser” foram a soma da
aspartato, threonina, serina, asparagina, glutamato, glutamina, glicina, alanina, citosina
valina, cisteina, metionina, isoleucina, leucina, tirosina, fenilalanina, histidina,
triptofano, ornitina, lisina e arginina obtidos um a um no aparelho.
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