Dissertação em PDF - departamento de engenharia florestal - ufpr ...
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4.3.2 Inoculação das S<strong>em</strong>entes<br />
Após a realização <strong>de</strong> toda a assepsia, ainda <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> câmara <strong>de</strong> fluxo<br />
laminar, o tegumento externo <strong>de</strong> cada s<strong>em</strong>ente foi inteiramente r<strong>em</strong>ovido com<br />
auxílio <strong>de</strong> bisturi. As s<strong>em</strong>entes ficaram com aspecto que po<strong>de</strong> ser visualizado na<br />
Figura 4.<br />
As s<strong>em</strong>entes foram inoculadas individualmente <strong>em</strong> frascos contendo 10 ml<br />
<strong>de</strong> meio <strong>de</strong> cultura MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962), esterilizados <strong>em</strong> autoclave a<br />
121°C com pressão <strong>de</strong> 1 atm por 20 minutos, contendo meta<strong>de</strong> da concentração <strong>de</strong><br />
nutrientes, s<strong>em</strong> adição <strong>de</strong> sacarose e gelificado com <strong>de</strong> 6 g/l <strong>de</strong> ágar Vetec®. Os<br />
frascos foram lacrados com papel alumínio e filme <strong>de</strong> PVC e então acondicionados<br />
<strong>em</strong> sala <strong>de</strong> crescimento com irradiância <strong>de</strong> 20 μMol m -2 s -1 , fotoperíodo <strong>de</strong> 16 horas<br />
<strong>de</strong> luz e t<strong>em</strong>peratura média <strong>de</strong> 28°C, conforme Figura 5.<br />
O material foi mantido <strong>em</strong> sala <strong>de</strong> crescimento pelo período <strong>de</strong> 7 dias para<br />
que germinasse, conforme d<strong>em</strong>onstrado pela Figura 5. Após este período, foram<br />
avaliadas as porcentagens <strong>de</strong> germinação e contaminação do material in vitro.<br />
S<strong>em</strong>entes com <strong>em</strong>issão <strong>de</strong> raiz superior a 2 mm foram consi<strong>de</strong>radas como<br />
germinadas. As s<strong>em</strong>entes contaminadas por fungos e/ou bactérias e aquelas que<br />
não germinaram foram avaliadas e <strong>de</strong>scartadas. O aspecto das s<strong>em</strong>entes<br />
germinadas, após o período <strong>de</strong> 7 dias, po<strong>de</strong> ser visualizado na Figura 6.<br />
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