Dissertação em PDF - departamento de engenharia florestal - ufpr ...

4.3.2 Inoculação das Sementes
Após a realização de toda a assepsia, ainda dentro de câmara de fluxo
laminar, o tegumento externo de cada semente foi inteiramente removido com
auxílio de bisturi. As sementes ficaram com aspecto que pode ser visualizado na
Figura 4.
As sementes foram inoculadas individualmente em frascos contendo 10 ml
de meio de cultura MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962), esterilizados em autoclave a
121°C com pressão de 1 atm por 20 minutos, contendo metade da concentração de
nutrientes, sem adição de sacarose e gelificado com de 6 g/l de ágar Vetec®. Os
frascos foram lacrados com papel alumínio e filme de PVC e então acondicionados
em sala de crescimento com irradiância de 20 μMol m -2 s -1 , fotoperíodo de 16 horas
de luz e temperatura média de 28°C, conforme Figura 5.
O material foi mantido em sala de crescimento pelo período de 7 dias para
que germinasse, conforme demonstrado pela Figura 5. Após este período, foram
avaliadas as porcentagens de germinação e contaminação do material in vitro.
Sementes com emissão de raiz superior a 2 mm foram consideradas como
germinadas. As sementes contaminadas por fungos e/ou bactérias e aquelas que
não germinaram foram avaliadas e descartadas. O aspecto das sementes
germinadas, após o período de 7 dias, pode ser visualizado na Figura 6.
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