ricardo aires - novembro 2008 - correo tese - Repositorio.ufc.br - UFC

como padrão interno diluído em 2,9mL de água bidestilada e deionizada. Após centrifugação,<br />
600µL foram utilizados para detecção pelo HPLC.<br />
5.9 Equipamentos e Condições Cromatográficas para Análise do HPLC-PAD<br />
O sistema utilizado foi analisador de carboidratos BioLC, composto de um<br />
módulo de bomba de gradiente GPM-2, um módulo de desgasificação de eluente EDM-II e<br />
um módulo de detector amperométrico pulsado com um eletrodo de trabalho de ouro (Dionex,<br />
Sunnyvale, CA, USA). Neste método, utilizou-se uma coluna de troca de ânions<br />
CarboPac-MA1 associada à coluna-guarda, também da Dionex. As amostras de urina foram<br />
injetadas através de autosampler e as análises foram quantificadas usando-se um sistema de<br />
dados BioAutoIon 450, ambos da Dionex.<br />
A análise de HPLC-PAD para mono e dissacarídeos foi realizada por meio de um<br />
sistema Dionex BioLC, composto de um módulo de bomba GP40 e detector ED40. Os<br />
açúcares foram eluídos com um eluente isocrático de NaOH (480mM) a um fluxo de 0,4<br />
ml/min, e a coluna mantida a temperatura ambiente. Os açúcares foram determinados com um<br />
detector amperométrico pulsado com a forma de onda consistindo do seguinte perfil de<br />
potencial-duração: amostragem, 0,15V, 720 ms; oxidação, 0,70V, 120ms; e redução, -0,30V,<br />
360ms. A faixa de saída do detector foi fixada em 1,0 mA, com tempo de resposta de<br />
integração de 3s.<br />
Os valores dos açúcares obtidos pelo HPLC são reportados em picomoles por<br />
50µL de volume. Posteriormente, esses valores são correlacionados com a dose ingerida pelo<br />
paciente (g) e volume urinário excretado (l), obtendo-se o percentual de excreção para cada<br />
açúcar. Foi utilizado o programa Excel (Microsoft Corp, Cupertine, CA) para integração<br />
desses dados.<br />
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