INTEGRIDADE E FUNCIONALIDADE DOS ... - Ainfo - Embrapa

Revisão de Literatura 18
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simultânea da integridade das membranas plasmática e acrossomal e da
função mitocondrial: PI com FITC-PSA e Rodamina 123; PI com FITC-PSA e
Mito Tracker Green FM (MITO); PI com FITC-PSA e a Mito Tracker Red
(CMXRos) e; PI com FITC-PSA e JC-1. Dentre os protocolos testados a
associação das sondas fluorescentes PI, FITC-PSA e JC-1 foi a escolhida
devido a sua simplicidade, alta repetibilidade e acurácia e por fornecer um
maior número de dados em relação às demais combinações.
2.2.2. Avaliação da Capacitação e Reação Acrossomal
As mudanças que ocorrem durante a capacitação, antes da reação
acrossomal são muito mais difíceis de serem acessadas (PÉREZ et al., 1996b).
Uma variedade de métodos indiretos têm sido estabelecida para avaliar
mudanças na membrana espermática indicativas de capacitação porém,
características comumente avaliadas tais como a reação acrossomal e a
capacidade fertilizante, representam eventos terminais os quais fornecem
pouca informação sobre a transição para a capacitação (GILLAN et al., 1997).
O desenvolvimento de técnicas para o acompanhamento da capacitação
espermática tem grande importância para a análise da função espermática e
comparação da eficácia de técnicas de reprodução (PÉREZ et al., 1996b). A
técnica de fluorescência pela clortetraciclina (CTC) tem sido aplicada em
espermatozóides ovinos com a vantagem de permitir não apenas a
diferenciação entre células com acrossomo intacto e reagido, mas também
dividir as células com acrossomo intacto em duas categorias funcionalmente
diferentes, não capacitadas e capacitadas (DasGUPTA et al., 1993; GILLAN et
al., 1997; LAUSMANN et al., 2004).
A CTC é uma sonda fluorescente quelante de cálcio que foi introduzida
como um antibiótico, a aureomicina, e mais tarde aplicada para examinar a
mobilização de cálcio pela mitocôndria. Subseqüentemente, ela foi usada para
determinar a morfologia acrossomal em espermatozóides de camundongo,
primeiro como um corante vital (SALING & STOREY, 1979) e então em células
fixadas (WARD & STOREY, 1984). A CTC rapidamente penetra pelas
membranas celulares, enquanto que para os anions e os íons cálcio (Ca 2+ )