INTEGRIDADE E FUNCIONALIDADE DOS ... - Ainfo - Embrapa
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Resultados e Discussão 129<br />
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espermatozóides ovinos permanecia intacta após o choque de frio. Windsor &<br />
White (1995) por sua vez observaram que o processo de congelação e<br />
descongelação, e não o resfriamento lento até 5 o C provocou a diminuição<br />
acentuada de células com atividade mitocondrial (absorção de R123), o que<br />
também está em desacordo com os achados deste trabalho no qual foi<br />
verificada uma redução acentuada do PMM logo na refrigeração do sêmen.<br />
Diferenças no mecanismo de ação assim como na sensibilidade de cada<br />
sonda fluorescente em identificar alterações celulares, precisam ser<br />
consideradas quando realizada a interpretação e comparação de resultados de<br />
diferentes autores (PINTADO et al., 2000). O CFDA por exemplo reflete a<br />
integridade da membrana plasmática (HARRISON & VICKERS, 1990)<br />
enquanto que a rodamina, apesar de identificar células com função<br />
mitocondrial (HOLT et al., 1988; WINDSOR & WHITE, 1995), não é capaz de<br />
diferenciar seus diferentes níveis como é possível com o uso do JC-1 (REERS<br />
et al., 1991). Salvioli et al. (1997) testaram a sensibilidade e especificidade de<br />
três sondas fluorescentes usadas para avaliar o potencial de membrana<br />
mitocondrial em citômetro de fluxo e concluíram que o JC-1 é a mais confiável,<br />
enquanto que as demais mostraram baixa sensibilidade (R123), ou<br />
comportamento não coerente devido a alta sensibilidade à mudanças no<br />
potencial de membrana plasmática (iodeto de 3,3’-diexiloxocarbocianina).<br />
Uma das possíveis explicações para as diferenças entre os resultados<br />
obtidos neste trabalho e aqueles relatados por Holt et al. (1988), Harrison &<br />
Vickers (1990) e Windsor & White (1995), pode estar no fato do JC-1 detectar<br />
alterações de ordem funcional ao invés de estrutural assim como de ter uma<br />
maior sensibilidade na identificação e estratificação de mudanças no potencial<br />
de membrana mitocondrial que são causadas pela criopreservação.<br />
A queda brusca do PMM principalmente na etapa de refrigeração, pode<br />
ter acontecido em decorrência de danos peroxidativos. Morani (2004) observou<br />
grande produção de radicais livres no sêmen criopreservado de bovinos<br />
especialmente na etapa de refrigeração. Tem sido relatado que as membranas<br />
mitocondriais dos espermatozóides possuem uma proporção relativamente alta<br />
de fosfolipídios com elevado grau de insaturação (LENZ et al., 1999) o que<br />
pode deixar essa estrutura mais susceptível aos efeitos da peroxidação