INTEGRIDADE E FUNCIONALIDADE DOS ... - Ainfo - Embrapa

Resultados e Discussão 129
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espermatozóides ovinos permanecia intacta após o choque de frio. Windsor &
White (1995) por sua vez observaram que o processo de congelação e
descongelação, e não o resfriamento lento até 5 o C provocou a diminuição
acentuada de células com atividade mitocondrial (absorção de R123), o que
também está em desacordo com os achados deste trabalho no qual foi
verificada uma redução acentuada do PMM logo na refrigeração do sêmen.
Diferenças no mecanismo de ação assim como na sensibilidade de cada
sonda fluorescente em identificar alterações celulares, precisam ser
consideradas quando realizada a interpretação e comparação de resultados de
diferentes autores (PINTADO et al., 2000). O CFDA por exemplo reflete a
integridade da membrana plasmática (HARRISON & VICKERS, 1990)
enquanto que a rodamina, apesar de identificar células com função
mitocondrial (HOLT et al., 1988; WINDSOR & WHITE, 1995), não é capaz de
diferenciar seus diferentes níveis como é possível com o uso do JC-1 (REERS
et al., 1991). Salvioli et al. (1997) testaram a sensibilidade e especificidade de
três sondas fluorescentes usadas para avaliar o potencial de membrana
mitocondrial em citômetro de fluxo e concluíram que o JC-1 é a mais confiável,
enquanto que as demais mostraram baixa sensibilidade (R123), ou
comportamento não coerente devido a alta sensibilidade à mudanças no
potencial de membrana plasmática (iodeto de 3,3’-diexiloxocarbocianina).
Uma das possíveis explicações para as diferenças entre os resultados
obtidos neste trabalho e aqueles relatados por Holt et al. (1988), Harrison &
Vickers (1990) e Windsor & White (1995), pode estar no fato do JC-1 detectar
alterações de ordem funcional ao invés de estrutural assim como de ter uma
maior sensibilidade na identificação e estratificação de mudanças no potencial
de membrana mitocondrial que são causadas pela criopreservação.
A queda brusca do PMM principalmente na etapa de refrigeração, pode
ter acontecido em decorrência de danos peroxidativos. Morani (2004) observou
grande produção de radicais livres no sêmen criopreservado de bovinos
especialmente na etapa de refrigeração. Tem sido relatado que as membranas
mitocondriais dos espermatozóides possuem uma proporção relativamente alta
de fosfolipídios com elevado grau de insaturação (LENZ et al., 1999) o que
pode deixar essa estrutura mais susceptível aos efeitos da peroxidação