Resultados e Discussão 108 _____________________________________________________________________ 4.3.1.Avaliação Simultânea das Membranas Espermáticas As imagens dos espermatozóides após a combinação das sondas fluorescentes podem ser visualizadas na Figura 15. Pela ANOVA dos resultados relacionados à freqüência das subpopulações obtidas pela avaliação das membranas espermáticas (AME) (Tabelas 9 e 10), pôde-se constatar que para as subpopulações SBP 1, 2, 3, 5, 6, 7 e 8 houve influência significativa (P
Resultados e Discussão 110 _____________________________________________________________________ Tabela 9 – Resumo da análise de variância das freqüências de espermatozóides classificados dentro das subpopulações (SBP) com membrana plasmática íntegra obtidas na avaliação simultânea das membranas espermáticas (AME) do sêmen ovino pela combinação do iodeto de propídio (PI), iodeto de 5,5’,6,6’tetracloro-1,1,3,3’- tetraetilbenzimidazolilcarbocianina (JC-1) e aglutinina de Pisum sativum conjugada a isotiocianato de fluoresceína (FITC-PSA), tendo como causas de variação a crioresistência da membrana plasmática (CRIO) mensurada a partir da avaliação da integridade de membrana plasmática (IMP), os grupos experimentais (Grupo), os momentos de avaliação do sêmen (Momento) e a interação entre eles (CRIO x Grupo; CRIO x Momento, Grupo x Momento, CRIO x Grupo x Momento). Parâmetro Causas de Variação SBP 1 SBP 2 SBP 3 SBP 4 Graus de liberdade Quadrado médio F Valor de P CRIO 2 3519,55850000 10,21 0,0001 Grupo 4 63,03201122 0,18 0,9472 Momento 3 118995,45544872 345,36 0,0001 CRIO x Grupo 8 63,86172917 0,19 0,9929 CRIO x Momento 6 1390,06383333 4,03 0,0006 Grupo x Momento 12 222,61087518 0,65 0,8026 CRIO x Grupo x Momento 24 61,66474769 0,18 1,0000 CRIO 2 8117,33773611 25,15 0,0001 Grupo 4 280,58473558 0,87 0,4821 Momento 3 29471,12652244 91,33 0,0001 CRIO x Grupo 8 25,08350000 0,08 0,9997 CRIO x Momento 6 2601,55195833 8,06 0,0001 Grupo x Momento 12 114,55834669 0,35 0,9777 CRIO x Grupo x Momento 24 76,78272222 0,24 0,9999 CRIO 2 1,19412500 5,46 0,0046 Grupo 4 0,05972222 0,27 0,8954 Momento 3 0,98150819 4,48 0,0041 CRIO x Grupo 8 0,10336111 0,47 0,8757 CRIO x Momento 6 0,58664352 2,68 0,0145 Grupo x Momento 12 0,09364316 0,43 0,9523 CRIO x Grupo x Momento 24 0,09722222 0,44 0,9904 CRIO 2 11,89462500 4,81 0,0085 Grupo 4 1,01846955 0,41 0,7998 Momento 3 1,50693554 0,61 0,6088 CRIO x Grupo 8 1,89233333 0,77 0,6330 CRIO x Momento 6 2,83992130 1,15 0,3326 Grupo x Momento 12 2,44735132 0,99 0,4568 CRIO x Grupo x Momento 24 1,76462037 0,71 0,8385 Crioresistência da Membrana Plasmática (CRIO): CRIO 1 – membrana com menor resistência; CRIO 2 – membrana com resistência intermediária; CRIO 3 – membrana com maior resistência. Grupo Experimental (Grupo): C – controle; TC – colesterol; TD – desmosterol; TA – ácido oléico-linoléico; TL – α-lactoalbumina. Momento: S-FR – sêmen in natura; S-RE – sêmen refrigerado; S-CD – sêmen congelado-descongelado; S-IN – sêmen incubado. Subpopulações de AME: SBP 1 - membrana plasmática intacta, acrossomo intacto e alto potencial de membrana mitocondrial; SBP 2 - membrana plasmática intacta, acrossomo intacto e baixo potencial de membrana mitocondrial; SBP 3 - membrana plasmática intacta, acrossomo lesado e alto potencial de membrana mitocondrial; SBP 4 - membrana plasmática intacta, acrossomo lesado e baixo potencial de membrana mitocondrial.