INTEGRIDADE E FUNCIONALIDADE DOS ... - Ainfo - Embrapa
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Material e Métodos 75<br />
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3.5. Fracionamento, Diluição e Envase do Sêmen<br />
O esquema de fracionamento, diluição e envase do sêmen está<br />
demonstrado na Figura 4. Após a remoção das amostras para realização das<br />
análises iniciais (Item 3.8), eram realizados os cálculos para fracionamento e<br />
distribuição do sêmen em volumes iguais entre os cinco grupos experimentais<br />
(C, TC, TD, TA e TL). As alíquotas de sêmen fracionado continham<br />
aproximadamente 550 x 10 6 sptz e foram diluídas para se obter o equivalente a<br />
5,5 doses inseminantes de 0,25 mL com 100 x 10 6 sptz cada o que<br />
correspondia a uma concentração espermática final de 400 x 10 6<br />
espermatozóides/mL.<br />
A diluição foi realizada em três etapas (Figura 5) nas quais foram<br />
adicionados ao sêmen, os componentes, frações e soluções que<br />
representavam o volume final da diluição: sêmen + ST + meio diluidor<br />
(FA+F1+F2). Na 1ª etapa da diluição o sêmen fracionado era transferido para<br />
cinco tubos de ensaio mantidos em banho-maria (32 o C) que continham<br />
previamente a FA do meio diluidor adicionada da ST correspondente a cada<br />
grupo experimental. Para manter uma condição de igualdade, os volumes<br />
adicionados das ST e FA eram os mesmos para todos os tratamentos dentro<br />
do mesmo ejaculado sendo preservada a concentração dos aditivos ajustandose<br />
o volume da FA de acordo com o volume da alíquota de sêmen. O volume<br />
total dessa primeira etapa de diluição representava ¼ do volume final da<br />
diluição. Após a cuidadosa e completa homogeneização do conteúdo de cada<br />
tubo experimental, a mistura foi co-incubada por 15 minutos em banho-maria a<br />
32 o C. Na 2ª etapa da diluição acrescentava-se vagarosamente aos tubos<br />
experimentais a F1 do meio diluidor em um montante também correspondente<br />
a ¼ do volume final da diluição completando-se assim ½ do volume final da<br />
diluição ao final desta etapa (¼ da 1ª etapa + ¼ da 2ª etapa = ½). Realizada<br />
uma cuidadosa homogeneização procedia-se a 3ª etapa da diluição<br />
acrescentando-se suavemente a F2 do meio diluidor cuja quantidade<br />
correspondia a ½ do volume final da diluição. Assim, após todas as etapas se<br />
obtinha o volume total da diluição (¼ da 1ª etapa + ¼ da 2ª etapa + ½ da 3ª<br />
etapa).