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Material e Métodos 71
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cujas composições se basearam na formulação do meio descrito por El-Alamy
& Foote (2001) e modificado por Maia et al. (2005).
As diferenças entre as frações estão detalhadas no Anexo I e resumidas
abaixo na Tabela 1 sendo basicamente as seguintes: a FA não possui
nenhuma fonte de lipídio como é o caso da gema de ovo e nenhum detergente
como o Lauril Sulfato de Sódio para não interferir na incorporação de alguns
aditivos como o colesterol e o desmosterol; a F1 possui todos os componentes
do meio diluidor exceto o glicerol e; a F2 possui todos os componentes,
inclusive o glicerol.
Tabela 1. Diferenças na composição entre as frações do meio diluidor.
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2 White Martins.
COMPONENTES
FRAÇÕES
FA F1 F2
Tris x x x
Glucose x x x
Ácido Cítrico x x x
Penicilina e Estreptomicina x x x
Gema de ovo x x
Lauril Sulfato de Sódio x x
Glicerol x
3.3.2. Complexos de Inclusão de Colesterol e de Desmosterol
O colesterol e o desmosterol foram submetidos a um procedimento
baseado na metodologia descrita por Purdy & Graham (2004a e 2004b) para
formação do complexo de inclusão com a metil-β-ciclodextrina (MβCD) como
demonstrado nas Figuras 2 e 3. Inicialmente eram preparadas em um tubo de
ensaio de 15 mL as soluções do complexo de inclusão de colesterol (CLC) ou
de desmosterol (DLC) (Anexo I). Essas soluções foram completamente
homogeneizadas com auxílio de um agitador de tubos e, em seguida,
submetidas a um fluxo contínuo e suave de gás de nitrogênio 2 (N2) com pureza
mínima de 90%.