INTEGRIDADE E FUNCIONALIDADE DOS ... - Ainfo - Embrapa
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Material e Métodos 71<br />
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cujas composições se basearam na formulação do meio descrito por El-Alamy<br />
& Foote (2001) e modificado por Maia et al. (2005).<br />
As diferenças entre as frações estão detalhadas no Anexo I e resumidas<br />
abaixo na Tabela 1 sendo basicamente as seguintes: a FA não possui<br />
nenhuma fonte de lipídio como é o caso da gema de ovo e nenhum detergente<br />
como o Lauril Sulfato de Sódio para não interferir na incorporação de alguns<br />
aditivos como o colesterol e o desmosterol; a F1 possui todos os componentes<br />
do meio diluidor exceto o glicerol e; a F2 possui todos os componentes,<br />
inclusive o glicerol.<br />
Tabela 1. Diferenças na composição entre as frações do meio diluidor.<br />
_______________________________________________________<br />
2 White Martins.<br />
COMPONENTES<br />
FRAÇÕES<br />
FA F1 F2<br />
Tris x x x<br />
Glucose x x x<br />
Ácido Cítrico x x x<br />
Penicilina e Estreptomicina x x x<br />
Gema de ovo x x<br />
Lauril Sulfato de Sódio x x<br />
Glicerol x<br />
3.3.2. Complexos de Inclusão de Colesterol e de Desmosterol<br />
O colesterol e o desmosterol foram submetidos a um procedimento<br />
baseado na metodologia descrita por Purdy & Graham (2004a e 2004b) para<br />
formação do complexo de inclusão com a metil-β-ciclodextrina (MβCD) como<br />
demonstrado nas Figuras 2 e 3. Inicialmente eram preparadas em um tubo de<br />
ensaio de 15 mL as soluções do complexo de inclusão de colesterol (CLC) ou<br />
de desmosterol (DLC) (Anexo I). Essas soluções foram completamente<br />
homogeneizadas com auxílio de um agitador de tubos e, em seguida,<br />
submetidas a um fluxo contínuo e suave de gás de nitrogênio 2 (N2) com pureza<br />
mínima de 90%.