Curso de Verão em FARMACOLOGIA - Insight Equipamentos ...

álcool; 0,972 g tiopental e 42,8 ml propilenoglicol); toxina: MPTP (Sigma)
dissolvido em solução salina na concentração de 100 mg/ml.
Procedimento
Os animais, antes da cirurgia, deverão ser mantidos em uma sala com
umidade e temperatura controladas (22 ± 2°C), em um ciclo de claro-escuro de
12h (7:00-19:00 h). Água e comida são fornecidas à vontade aos animais durante
todos os experimentos. Os procedimentos utilizados devem estar de acordo com
as normas do CEEA (Comitê de Ética em Experimentação Animal) da UFPR.
Todos os cuidados são tomados no intuito de minimizar o número de animais
utilizados ao longo dos experimentos sem, no entanto, comprometer a análise
estatística dos resultados. Além disso, esforços máximos são tomados no intuito
de reduzir eventuais desconfortos causados aos animais durante os
experimentos. Tais preocupações se adequam às modernas práticas bioéticas de
experimentação animal que visam o bem-estar animal levando em conta três
metas principais: redução, remanejamento e refinamento.
Previamente à cirurgia, os animais são anestesiados. Os animais do grupo
que recebem a toxina e grupo sham são colocados em um aparelho estereotáxico
(David Kopf, modelo 957L). A desinfecção do local da incisão pode ser feita com
solução de álcool iodado. Em seguida aplica-se anestésico local (lidocaína 0,2 mL
com 2% de vasoconstritor) via s.c. na derme que recobre o crânio dos ratos. Com
auxílio de um bisturi, os músculos do crânio são afastados para a exposição dos
ossos da caixa craniana. As coordenadas são determinadas a partir do bregma: -
5,0 mm do bregma; latero-lateral (LL) ± 2,1 mm da linha média; dorsoventral (DV),
- 8,0 mm do crânio (Paxinos e Watson, 2005), e em seguida são feitas
perfurações no crânio dos animais com uma broca de baixa rotação, permitindo a
microinfusão bilateral da toxina (MPTP), na dose de 0,33 µL/min por 3 minutos
(totalizando 1µL), diretamente na SN. A microinfusão das toxinas é realizada com
o auxílio de uma agulha (30 gauge) conectada a um tubo de polietileno adaptado
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