Curso de Verão em FARMACOLOGIA - Insight Equipamentos ...

Atividade de Acetilcolinesterase: (baseado em ELLMAN et al. (1961)
modificado para microplaca por SILVA DE ASSIS (1998).
Princípio do método: exposição de um homogeneizado de tecido muscular ou
cerebral e do reagente DTNB ao substrato acetiltiocolina. Este substrato é
hidrolisado pela AChE em tiocolina e acetato. A tiocolina resultante reage com
o DTNB gerando o ânion 5-Tio-2-nitrobenzoato responsável pelo aparecimento
de coloração amarela que pode ser monitorado pelo aumento de absorbância a
405 nm.
1. Homogeneizar as amostras de cérebro e músculo com o uso de
microhomogeneizador, em tampão fosfato 0,1 M, pH 7,5, na proporção de 1:10
(0,100 g de tecido para 1000 µL de tampão).
2. Centrifugar a 10000 x g, por 20 minutos, a 4ºC.
3. Diluir as amostras em tampão fosfato 0,1M, pH 7,5, na proporção de 1:10.
4. Em microplaca:
multicanal)
Adicionar 50 µl da amostra diluída em quadruplicata
Acrescentar 200 µl de DTNB 0,75 mM.
Acrescentar 50 µl ATC na concentração padronizada(com micropipeta
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