Diagnóstico molecular das infecções por Chlamydia trachomatis e ...

minutos à temperatura ambiente. A seguir foram adicionados 250 L de diluente de
amostras, para a extração do DNA, e as amostras centrifugadas por 10 minutos a
12.500 x g.
Swab endocervical - Os swabs endocervicais foram processados
adicionando-se 100 L da amostra a 100 L de tampão de lise. Esta etapa de lise foi
necessária, pois os swabs foram coletados utilizando-se o kit de coleta Digene. As
amostras foram então incubadas por 10 minutos à temperatura ambiente. Em
seguida, foram adicionados 200 L de tampão diluente e as amostras foram
novamente incubadas nas mesmas condições.
Swab vaginal - O teste AMPLICOR CT/NG recomenda o diagnóstico das
infecções clamidial e gonocócica apenas em amostras de swab endocervical e urina.
Desta forma, não há em seu manual instruções para o processamento do swab
vaginal. Assim, foram feitos testes iniciais para definir o melhor tipo de
processamento. Para estes testes, foram selecionadas algumas amostras de swab
vaginal de pacientes com amostras de urina previamente analisadas. Parte destas
amostras foi processada de acordo com as recomendações para o processamento
da urina e outra parte de acordo com o processamento do swab endocervical. Em
seguida, fez-se a amplificação e a detecção. Ao final da PCR os resultados dos
swabs vaginais foram avaliados e comparados com os resultados das amostras de
urina.
Todos os swabs vaginais testados apresentaram os mesmos resultados
encontrados na urina independente do tipo de processamento a que foram
submetidos, ou seja, se a urina tinha resultado negativo para C. trachomatis e/ou N.
gonorrhoeae, o swab vaginal da paciente também apresentou resultado negativo e o
mesmo aconteceu com os casos positivos. Os resultados dos swabs vaginais não
foram comparados com os resultados dos swabs endocervicais, pois estes ainda
não tinham sido testados.
Como os resultados não diferiram e o processamento do swab endocervical é
menos laborioso e mais rápido em relação ao processamento da urina, decidiu-se
que as amostras de swab vaginal seriam processadas como os swabs
endocervicais.
Todas as amostras biológicas processadas foram armazenadas entre 2 e 8 o C
por pelo menos 3 dias (e no máximo 7 dias), para evitar a inibição da enzima Taq
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