Diagnóstico molecular das infecções por Chlamydia trachomatis e ...

encaminhadas para o Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular Aplicadas às
Doenças Infecciosas do IPTSP/UFG, onde foram congeladas a - 20ºC até a
realização das análises.
4.5 Diagnóstico laboratorial
As amostras foram examinadas empregando o kit AMPLICOR CT/NG (Roche
Molecular Systems, Branchburg, N.J.).
O teste AMPLICOR CT/NG é um ensaio multiplex, qualitativo, que permite a
amplificação do DNA de C. trachomatis, de N. gonorrhoeae e do controle interno (CI)
da reação, simultaneamente. O CI é uma seqüência de DNA, com regiões de ligação
de primers idênticas à da seqüência alvo de C. trachomatis e com tamanho e
composição de bases similares a essa seqüência. O CI foi adicionado em todas as
amplificações para monitorar o processo de amplificação. As amostras podem conter
substâncias que inibem a ação da Taq DNA polimerase que é evidenciada pela não
amplificação do CI invalidando-se assim o resultado do teste. Se o controle interno é
corretamente amplificado em uma reação, pode-se validar o resultado (Rosenstraus
et al. 1998).
O teste AMPLICOR CT/NG é realizado em três etapas: processamento das
amostras, amplificação por reação em cadeia da polimerase (PCR) e detecção.
4.5.1 Processamento das amostras
O processamento é a etapa de preparação da amostra para a amplificação e
era realizado na sala de pré-amplificação. Diferente das etapas de amplificação e
detecção, o processamento é a única fase do teste que varia de acordo com a
amostra utilizada:
Urina - Um volume de 500 L das amostras de urina foi adicionado a 500 L
de tampão de lavagem. Após uma incubação de 15 minutos a 37ºC, as amostras
foram centrifugadas a 12.500 x g por 5 minutos. O sobrenadante foi descartado e o
pellet (contendo células epiteliais, leucócitos ou células associadas a C. trachomatis
e N. gonorrhoeae) foi tratado com 250 L de tampão de lise e incubado por 15
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