Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos

Testes de Sensibilidade
aos Antimicrobianos

Indicações do Antibiograma
• Quando o perfil de susceptibilidade não é
previsível
• Estudos de epidemiologia de resistência
• Estudos de novos agentes
antimicrobianos
• Não recomendado em microrganismos da
microbiota normal
– Ex: Staphylococcus coagulase negativo de
secreção nasal

Seleção dos antimicrobianos
• Responsabilidade do laboratório testar os
antimicrobianos mais apropriados para o microrganismo
isolado e sítio da infecção
• Os antimicrobianos testados devem ser apropriados
para o tipo de hospital ou instituição
• As orientações sobre os antimicrobianos mais
adequados para cada grupo de microrganismos são
publicadas e atualizadas anualmente pelo NCCLS
(National Committee for Clinical Laboratory Standards)

Principais Classes de Antimicrobianos
Classes Subclasses Exemplos
Penicilinas
(Betalactâmicos)
Betalactâmicos +
inibidores de
betalactamases
Cefens
(Betalactâmicos)
Carbapenens
(Betalactâmico)
Penicilinas naturais Penicilina G
Penicilinas resistentes a
Oxacilina, meticilina e cloxacina
betalactamases
Aminopenicilinas Ampicilina e amoxicilina
Carboxipenicilinas Carbenicilina e ticarcilina
Ureidopenicilinas Piperacilina, mezlocilina e azocilina
Amoxicilina + Ácido clavulânico
Ampicilina + Sulbactam
Tirarcilina + Ácido clavulânico
Piperacilina + Tazobactam
Cefalosporinas de 1ª Geração Cefalotina, cefazolina, cefalexina
Cefamicinas (2ª Geração) Cefoxitina, cefotetan, cefmetazol
Cefalosporinas de 2ª Geração Cefuroxima sódica, cefamandol,
cefonicida
Cefalosporinas de 3ª Geração Cefoperazona, cefotaxima, ceftriaxona
Cefalosporinas de 4ª Geração Cefepima
Imipenem, meropenem, ertapenem
Aminoglicosídeos Amicacina, gentamicina, netilmicina,
neomicina
Quinolonas Ácido nalidíxico, ácido pipemídico

Principais Classes de Antimicrobianos
Classes Subclasses Exemplos
Fluoroquinolonas Ciprofloxacina, norfloxacina,
levofloxacina
Lincosamidas Clindamicina, lincomicina
Ansamicinas Rifampicina
Macrolídeos Eritromicina, azitromicina
Glicopeptídeos Vancomicina, teicoplanina
Tetraciclina Tetraciclina
Nitromidazol Metronidazol
Oxazolidinona Linezolida
Inibidores do ácido
fólico
Sulfametoxazol / trimetoprima,
sulfonamidas, trimetoprima

Métodos de avaliação
• Métodos convencionais:
– Microdiluição ou macrodiluição
– Difusão dos discos (Kirby-Bauer)
• Métodos não convenionais:
– E-test
– Testes especiais
• Resistência a Meticilina (MRSA)
• Resistência a Vancomicina (VISA)
• Detecção de betalactamases
– Automatizado

Método da microdiluição ou
• Diluição do antibiótico
macrodiluição
– Em caldo – Concentração Inibitória Mínima (CIM)
• Macrométodo
• Micrométodo
– Em ágar – CIM

Método de Difusão
• Técnica qualitativa
• Meio de cultura: Ágar Müeller-Hinton
– Transparência e reprodutibilidade
– Baixos teores de inibidores
– Crescimento satisfatório
• Vantagens
– Fácil execução
– Grande utilização
– Escolha flexível dos antibióticos
– Custo operacional menor

Método de Difusão
Princípio do método da difusão de discos

Método de Difusão
Padronização de Kirby e Bauer
• Preparo do inóculo
• Turbidimetria
• Meio de escolha
• Semeadura
• Uso de discos
• Incubação e leitura

Preparação do inóculo
bacteriano
• Padrão de turvação para o preparo do
inóculo:
– Escala de McFarland 0,5
• 0,5ml de BaCl 2
• 99,5ml de H 2 SO 4
• 10 8 UFC/ml
Cartão para ajuste do inóculo

Preparação do inóculo
• Método do crescimento
bacteriano
– Selecionar 3-4 colônias com a mesma morfologia
– Inocular em 3ml de caldo TSB ou Mueller-Hinton
– Incubar 33-35 o C até atingir turvação 0,5 McFarland
– Se ultrapassar a turbidez ajustar com caldo TSB, Mueller-
Hinton ou solução salina estéril
• Método da suspensão direta de colônias
– Suspensão direta em meio líquido ou salina de colônias
crescidas por 16-24 horas
– Ajuste até atingir turvação 0,5 McFarland

Distensão do inóculo
• Dentro de 15 minutos após
ajuste do inóculo
• Introduzir swab estéril na
suspensão ajustada
• Comprimir o swab na
parede interna do tubo para
retirar o excesso do inóculo
• Semear na superfície do
meio em 3 direções, sem
deixar nenhuma área sem
semear
• Deixar secar com as
tampas semi-abertas

Distensão do inóculo
Inóculo Inadequado Inóculo Adequado

Seleção dos Antibióticos a
• Microrganismo isolado
• Local da infecção
Testar
• Origem do paciente externo – ambulatório
interno – hospital
• Paciente – dependente da via de administração
• Idade do paciente – quinolonas e tetraciclinas não são
indicadas em pacientes pediátricos
• Disponibilidade no mercado local / nacional

Aplicação dos Discos
• Colocar no máximo 12 discos em placas de 150mm
e não mais que 5 discos em placas de 90mm
• Distância entre discos e entre borda da placa de
2,5-3cm
• Colocar o disco e pressionar levemente com auxílio
de uma pinça
• Uma vez colocado o disco, não mais remover do
lugar pois a difusão da droga é imediata

Aplicação dos Discos

Medida do Halo de Inibição
• O diâmetro do halo de inibição é lido com auxílio de uma
régua sobre o fundo da placa
• Em placas de MH com sangue deve-se ter cuidado para ler a
zona de inibição e não a zona de hemólise
• Amostras de Proteus spp. podem apresentar pequeno véu
dentro do halo de inibição – ignorar o véu e ler do ponto onde
se inicia o crescimento
• Colônias pequenas dentro do halo de inibição devem ser
verificadas se são clones resistentes ou eventual
contaminação
• Halos de inibição devem ser interpretados nas categorias
sensível, intermediário ou resistente, de acordo com critérios
estabelecidos pelo NCCLS

Halo de
leitura
em mm
Medida do Halo de Inibição

Medida do Halo de Inibição
Paquímetro Régua milimetrada

Associações
de Antibióticos
Autonomia
Sinergismo
Antagonismo
Sinergismo

Método do E-test
• Combina os princípios da difusão do
disco e da diluição
• Consiste de uma fita plástico inerte,
medindo 5,5mm de largura por
60mm de comprimento
• De um lado da fita está impressa
uma escala de CIM (µg/ml) com um
gradiente de concentração que varia
de 0,016 a 256 µg/ml ou 0,002 a 32
µg/ml, a depender do antimicrobiano
• Pode ser utilizado para uma grande
variedade de microrganismos

Detecção de ESBL
• Beta-lactâmico associado ao inibidor de
beta-lactamase
• E. coli e K. pneumoniae
• Métodos:
– Disco aproximação
– Disco combinado
– E-test
• Aumento do halo ou zonas fantasmas
• Reportar resistência à todas as
cefalosporinas, penicilinas e aztreonam

Detecção de ESBL
Disco aproximação
3mm
AZT
3
CTX AMO/AC
CAZ
3mm
CRO
AZT = Aztreonam
CRO = Ceftriaxona
CAZ = Ceftazidima
CTX = Cefotaxima
AMO/AC = Amoxicilina +
Ácido clavulânico

Detecção de ESBL

Interpretação do Antibiograma
Resistência intrínseca apresentada por algumas espécies bacterianas
Gênero ou espécie Resistência a
Citrobacter amalonaticus Ampicilina
Citrobacter freundii Ampicilina, cefalotina, cefazolina
Citrobacter diversus Ampicilina
Edwardsiella tarda Colistina
Enterobacter sp. Ampicilina, cefalotina, cefazolina, betalactamicos com
inibidores de betalactamases
Hafnia alvei Ampicilina, cefalotina
Klebsiella pneumonia Ampicilina
Proteus mirabilis Polimixinas, tetraciclina, nitrofurantoína
Proteus vulgaris Polimixinas, ampilcilina, nitrofurantoína, tetraciclina
Morganella morganii Polimixinas, ampilcilina, nitrofurantoína, cefalotina
Providencia rettgeri Polimixinas, ampilcilina, nitrofurantoína, tetraciclina
Providencia sp. Não- Polimixinas, ampilcilina, nitrofurantoína,
Serratia
rettgeri
marcescens Polimixinas, ampilcilina, nitrofurantoína, cefalotina

Interpretação do Antibiograma
Resultados que não devem ser liberados mesmo que a leitura no
antibiograma apresente sensibilidade
Antimicrobianos Microrganismos
Cefalosporinas de 1 e 2ª gerações
e aminoglicosídeos
Salmonella e Shigella isoladas de fezes
Betalactâmicos e carbapenens Staphylococcus spp. resistentes à
Cefalosporinas, aminoglicosídeos, Enterococcus oxacilina spp.
clindamicina e
sulfametoxazol/trimetoprima
Cefalosporinas Listeria spp.