RICARDO GENARI CARACTERÍSTICAS DE ... - SBI-Café - UFV

características são semelhantes às obtidas para Yersinia e Klebsiella pneumoniae
(Chatterjee et al.,1981, citados por TIEN et al., 1981). As isoenzimas de PAL
extracelulares purificadas de E. chrysanthemi foram mais ativas com Ca +2 ,
enquanto outros monovalentes não interfiriram em suas atividades (FAVEY et al.,
1992).
A PAL extracelular de Fusarium oxysporum lycopeisici também foi inibida
por EDTA e ativada com CaCl2 (Di PIETRO e RONCERO, 1996). A PAL
extracelular de Cladosporium cucumerinum possuiu atividade dependente de
cálcio, à razão de 0,32 de íon cálcio por grupos carboxil de ácido
poligalacturônico, não sendo reposto por outros cátions mono ou bivalentes
(ROBERTSEN, 1989). Para F. solani, a razão foi de 0,24 (CRAWFORD e
KOLATTUKUDY, 1987).
Os cátions bivalentes possuem uma forte afinidade pelos grupos carboxil do
ácido poligalacturônico e também podem atuar como cofatores para a enzima. O
polímero tende a possuir alguma forma de ligação iônica com os cátions, causando
um efeito progressivo de redução das cargas negativas do substrato e, talvez,
induzindo a ação transeliminativa sobre o mesmo (ROBERTSEN, 1989).
A análise do sobrenadante da cultura de Klebsiella oxytoca e das várias
frações obtidas das células mostrou que a enzima está presente no interior da
célula (2,62 µmoles p. i./ min. ⋅ mg proteína) (Quadro 2). O índice expressivo de
atividade ocorreu apenas em pectato liase do sobrenadante das células rompidas.
Contudo, em razão de a extração da enzima do periplasma ter sido feita sem a
adição de um forte inativador da enzima, o EDTA, a eficiência do método de
extração ficou prejudicada. Além disso, não foi verificada a possibilidade de o
método resultar em lise de algumas células e se a sua eficiência, mesmo com
EDTA, seria suficientemente alta, para que se pudessem detectar atividades
mínimas de enzima periplasmática. Dessa forma, não foi descartada a possibilidade
de a PAL extracelular ser uma enzima intracelular.
Quadro 2 - Atividade de pectato liase no sobrenadante do crescimento e nas várias
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