RICARDO GENARI CARACTERÍSTICAS DE ... - SBI-Café - UFV

3.8.3. Verificação da estabilidade térmica
O estudo da estabilidade térmica da enzima foi realizado na suspensão de
células rompidas incubadas às temperaturas entre 20 e 60ºC, por uma hora. As
temperaturas escolhidas para a incubação foram as de 20, 25, 30, 35, 40, 45 e 50ºC
e o método padrão de dosagem de PAL foi adotado, a 40ºC, por 40 min, para a
verificação da taxa de produtos formados.
3.8.4. Determinação da temperatura ótima de atividade
A determinação da temperatura de maior taxa de formação dos produtos
insaturados foi efetuada por meio de incubação das misturas de reação compostas
por 0,5 mL de suspensão de células rompidas e 3,0 mL de substrato,
separadamente, em diferentes temperaturas do intervalo de 20 a 60ºC. As análises
enzimáticas de PAL das células rompidas seguiram o método padrão de análise,
com alteração apenas da temperatura de incubação, escolhidas como as de 16, 22,
30, 35, 40, 45, 50 e 56ºC.
3.8.5. Determinação do pH ótimo de atividade
Para a determinação do pH de maior taxa de formação dos produtos
insaturados pela enzima, foi efetuada uma solubilização do substrato PGA, em
diferentes soluções tampões e o pH corrigido para valores distintos. As soluções
tampões utilizadas foram: acetato de sódio (pH 4,1, 4,5, 5,1, e 5,8), solução de
acetato de sódio/ KH2PO4/ Tris (pH 6,4, 6,7, 7,0 e 7,4) e Tris-HCl (pH 7,7, 8,2,
8,6, 9,1, 9,4, 9,6 e 10,0), cada componente a uma concentração de 50 mM. As
análises enzimáticas de PAL das células rompidas seguiram o método padrão de
análise, com alteração apenas do pH das misturas de reação.
3.8.6. Determinação da constante de Michaelis-Menten, Km
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