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VOLTAR AO SUMÁRIO AVALIAÇãO DA IMUNOgeNIcIDADe DO ANTÍgeNO PSAA RecOMBINANTe De sTrePToCoCCus PneumoniAe SOROTIPO 14 Mateus Dalcin Luchese 1,3 ; Patrícia Grolli Ardenghi 2 ; Ariane Leites Larentis 3 ; Ana Paula Correa Argondizzo 3 , Marco Alberto Medeiros 3 Introdução: A PsaA é um fator de virulência de S. pneumoniae responsável por sua adesão ao epitélio nasofaríngeo, amplamente estudado por ter o seu potencial demonstrado para o desenvolvimento de uma vacina pneumocócica recombinante. Objetivos: Caracterizar anticorpos anti-rPsaA produzidos a partir da inoculação da proteína PsaA recombinante (rPsaA) em camundongos. Metodologia: Para a realização deste trabalho experimental, a proteína rPsaA foi produzida utilizando E.coli BL21Star(DE3)/pET28a, cultivada em meio TB (Terrific Broth) e a expressão foi induzida por IPTG (isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside). A fração solúvel, obtida por sonicação e centrifugação do cultivo foi purificada por HPLC por troca iônica (coluna Q FF). A proteína purificada foi complexada ao adjuvante hidróxido de alumínio para produção do imunógeno. A imunização em camundongos (linhagem suíço) consistiu de três doses intraperitoneais (20ug da vacina em volume de 200uL, diluído em PBS) com intervalo de sete dias entre cada inoculação, seguido de reforço intravenoso (20ug do antígeno rPsaA solúvel em volume de 70uL diluído em PBS). Após o período de tratamento, os animais foram anestesiados com éter etílico e eutanasiados imediatamente. Todas as análises subseqüentes para caracterização dos anticorpos produzidos foram realizadas por immunoblotting, que consiste de uma reação antígeno/anticorpo em membrana de nitrocelulose. Como controle positivo, foi utilizado um soro hiperimune de coelho anti-PsaA. Os soros obtidos destes animais foram titulados para determinação da concentração ideal dos anticorpos, incubando-os em diferentes diluições (1:200 até 1:20000). Definida a melhor diluição, pôde-se verificar a sensibilidade de detecção do anticorpo em relação às concentrações de rPsaA (500ng/uL-1ng/uL). Em seguida foi avaliada a especificidade através da reatividade cruzada a outros antígenos, como lisados das bactérias Staphylococcus aureus, Escherichia coli e proteína recombinante LigBrep (rLigBrep) de Leptospira interrogans. Resultados: Foi confirmada a especificidade dos anticorpos policlonais produzidos em camundongos contra rPsaA e o alto título em torno de 1:15000 para os soros dos animais imunizados. Os anticorpos gerados demonstraram elevada sensibilidade e avidez, reconhecendo a proteína em concentrações de até 5ng/uL. A avaliação da especificidade destes anticorpos indicou capacidade de reconhecer a PsaA nativa de S. pneumoniae, não apresentando reatividade cruzada quando expostos aos lisados celulares e a proteína rLigBrep. conclusões: Os dados demonstram que a rPsaA é capaz de induzir altos títulos de anticorpos com elevada sensibilidade e avidez, não apresentando reatividade cruzada para os demais antígenos testados. Estes anticorpos reconheceram a proteína nativa, indicando seu potencial como reagente no projeto de vacina pneumocócica recombinante em desenvolvimento em Biomanguinhos/Fiocruz. Palavras-chave: Pneumonia; Streptococcus pneumoniae; PsaA; Tecnologia de DNA Recombinante. 1 Aluno de Biomedicina do Centro Universitário Feevale 2 Docente do Curso de Biomedicina do Centro Universitário Feevale 3 Laboratório de Tecnologia Recombinante (BioManguinhos - Fundação Oswaldo Cruz) II Congresso Internacional de Bioanálises V Congresso Sul-Brasileiro & IX Semana Gaúcha de Biomedicina Ano 2 | Volume 2 | Agosto de 2009 86
VOLTAR AO SUMÁRIO AVALIAÇÃO DOS NÍVEIS DE PSA EM PACIENTES ATENDIDOS NA UNIDADE BÁSICA DE SAÚDE AURORA, CAMPO BOM, RS Eloir Dutra Lourenço 2 ; Rodrigo Staggemeier 1 ; Ivy Reichert Vital da Silva 1 ; Fernanda Baratieri Mota 1 ; Natália Höher Krug 1 ; Luana Silveira de Carvalho 1 ; Lisandra Chiamenti 1 ; Helena Schirmer 2 ; Fabiana Aparecida Vieira 2 ; Renato II Congresso Internacional de Bioanálises V Congresso Sul-Brasileiro & IX Semana Gaúcha de Biomedicina Ano 2 | Volume 2 | Agosto de 2009 Minozzo 2 Introdução: Projeto “Ações Biomédicas na Comunidade” desenvolvido pelo Centro Universitário Feevale em conjunto com o curso de biomedicina visa proporcionar assistência a moradores da comunidade Aurora, na cidade de Campo Bom, RS. Diversos exames são realizados gratuitamente na Unidade Básica de Saúde (UBS) deste bairro. Um deles é a pesquisa do antígeno prostático específico (PSA) que é um marcador tumoral utilizado para a detecção de patologias na próstata, uma glicoproteína codificada pelo gene hKLK3 no cromossomo 19, e sua expressão é estimulada por andrógenos. O PSA encontra-se no líquido seminal em uma concentração de 1.000.000 a 3.000.000 ng/mL, principalmente na forma livre, enquanto no plasma ou soro sua concentração é entre 0 a 4 ng/mL. Valores acima desses podem indicar disfunção prostática, entretanto, há casos de homens que desenvolveram patologias mesmo possuindo níveis considerados normais. O câncer de próstata é o tumor maligno mais freqüente na população masculina com idade superior a 50 anos. Objetivo: analisar os níveis séricos de PSA total em homens de diversas faixas etárias, correlacionando o risco de patologias com a idade do indivíduo. Metodologia: Foi realizado um levantamento de dados do período de janeiro de 2007 a dezembro de 2008 de amostras coletadas na UBS/Aurora. Foram avaliados os resultados de 83 homens, com idades entre 40 e 76 anos. Resultados: Faixa etária de 40-49 (n=27), 50-59 (n=30), 60-69 (n=14) e 70-76 (n=12) resultaram em 0,67 (±0,33), 1,1 (±0,75), 1,56 (±1,55) e 6,78 (±10,35) ng/mL respectivamente. Houve um caso de paciente com 73 anos com PSA total sérico de 38ng/mL, e este resultado confirmado com uma segunda coleta indicando disfunção prostática, e outros 5 indivíduos (1,68%) também apresentaram níveis elevados, todos com idade superior a 65 anos. Os demais apresentaram níveis considerados normais, porém, não descartadas possíveis patologias, já que na literatura há relatos de casos com estes mesmos resultados. conclusão: Os valores médios de PSA aumentaram de acordo com a idade, principalmente a partir dos 65 anos, demonstrando elevação nos riscos de patologias prostáticas devido ao envelhecimento e a importância da realização de exames preventivos para um possível diagnóstico prematuro e um melhor prognóstico da doença. Palavras-chaves: PSA; Câncer de Próstata; Prevenção. 1 Acadêmicos do Curso de Biomedicina - Centro Universitário Feevale – Brasil 2 Docentes do Curso de Biomedicina - Centro Universitário Feevale – Brasil 87
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AVALIAÇÃO DOS NÍVEIS DE PSA EM PACIENTES ATENDIDOS NA<br />
UNIDADE BÁSICA DE SAÚDE AURORA, CAMPO BOM, RS<br />
Eloir Dutra Lourenço 2 ; Rodrigo Staggemeier 1 ; Ivy Reichert Vital da Silva 1 ; Fernanda Baratieri Mota 1 ; Natália Höher<br />
Krug 1 ; Luana Silveira de Carvalho 1 ; Lisandra Chiamenti 1 ; Helena Schirmer 2 ; Fabiana Aparecida Vieira 2 ; Renato<br />
II Congresso Internacional de Bioanálises<br />
V Congresso Sul-Br<strong>as</strong>ileiro & IX Semana Gaúcha de Biomedicina<br />
Ano 2 | Volume 2 | Agosto de 2009<br />
Minozzo 2<br />
Introdução: Projeto “Ações Biomédic<strong>as</strong> na Comunidade” desenvolvido pelo Centro<br />
Universitário <strong>Feevale</strong> em conjunto com o curso de biomedicina visa proporcionar <strong>as</strong>sistência<br />
a moradores da comunidade Aurora, na cidade de Campo Bom, RS. Diversos exames são<br />
realizados gratuitamente na Unidade Básica de Saúde (UBS) deste bairro. Um deles é a pesquisa<br />
do antígeno prostático específico (PSA) que é um marcador tumoral utilizado para a detecção<br />
de patologi<strong>as</strong> na próstata, uma glicoproteína codificada pelo gene hKLK3 no cromossomo 19,<br />
e sua expressão é estimulada por andrógenos. O PSA encontra-se no líquido seminal em uma<br />
concentração de 1.000.000 a 3.000.000 ng/mL, principalmente na forma livre, enquanto no<br />
pl<strong>as</strong>ma ou soro sua concentração é entre 0 a 4 ng/mL. Valores acima desses podem indicar<br />
disfunção prostática, entretanto, há c<strong>as</strong>os de homens que desenvolveram patologi<strong>as</strong> mesmo<br />
possuindo níveis considerados normais. O câncer de próstata é o tumor maligno mais freqüente<br />
na população m<strong>as</strong>culina com idade superior a 50 anos. Objetivo: analisar os níveis séricos de<br />
PSA total em homens de divers<strong>as</strong> faix<strong>as</strong> etári<strong>as</strong>, correlacionando o risco de patologi<strong>as</strong> com<br />
a idade do indivíduo. Metodologia: Foi realizado um levantamento de dados do período de<br />
janeiro de 2007 a dezembro de 2008 de amostr<strong>as</strong> coletad<strong>as</strong> na UBS/Aurora. Foram avaliados<br />
os resultados de 83 homens, com idades entre 40 e 76 anos. Resultados: Faixa etária de 40-49<br />
(n=27), 50-59 (n=30), 60-69 (n=14) e 70-76 (n=12) resultaram em 0,67 (±0,33), 1,1 (±0,75), 1,56<br />
(±1,55) e 6,78 (±10,35) ng/mL respectivamente. Houve um c<strong>as</strong>o de paciente com 73 anos com<br />
PSA total sérico de 38ng/mL, e este resultado confirmado com uma segunda coleta indicando<br />
disfunção prostática, e outros 5 indivíduos (1,68%) também apresentaram níveis elevados,<br />
todos com idade superior a 65 anos. Os demais apresentaram níveis considerados normais,<br />
porém, não descartad<strong>as</strong> possíveis patologi<strong>as</strong>, já que na literatura há relatos de c<strong>as</strong>os com estes<br />
mesmos resultados. conclusão: Os valores médios de PSA aumentaram de acordo com a idade,<br />
principalmente a partir dos 65 anos, demonstrando elevação nos riscos de patologi<strong>as</strong> prostátic<strong>as</strong><br />
devido ao envelhecimento e a importância da realização de exames preventivos para um possível<br />
diagnóstico prematuro e um melhor prognóstico da doença.<br />
Palavr<strong>as</strong>-chaves: PSA; Câncer de Próstata; Prevenção.<br />
1 Acadêmicos do Curso de Biomedicina - Centro Universitário <strong>Feevale</strong> – Br<strong>as</strong>il<br />
2 Docentes do Curso de Biomedicina - Centro Universitário <strong>Feevale</strong> – Br<strong>as</strong>il<br />
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