PDF Interativo: utilize as bordas virar a página - Feevale

VOLTAR AO SUMÁRIO
AVALIAÇãO DA IMUNOgeNIcIDADe DO ANTÍgeNO PSAA
RecOMBINANTe De sTrePToCoCCus PneumoniAe SOROTIPO 14
Mateus Dalcin Luchese 1,3 ; Patrícia Grolli Ardenghi 2 ; Ariane Leites Larentis 3 ;
Ana Paula Correa Argondizzo 3 , Marco Alberto Medeiros 3
Introdução: A PsaA é um fator de virulência de S. pneumoniae responsável por sua adesão ao epitélio
nasofaríngeo, amplamente estudado por ter o seu potencial demonstrado para o desenvolvimento de
uma vacina pneumocócica recombinante. Objetivos: Caracterizar anticorpos anti-rPsaA produzidos
a partir da inoculação da proteína PsaA recombinante (rPsaA) em camundongos. Metodologia:
Para a realização deste trabalho experimental, a proteína rPsaA foi produzida utilizando E.coli
BL21Star(DE3)/pET28a, cultivada em meio TB (Terrific Broth) e a expressão foi induzida por IPTG
(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside). A fração solúvel, obtida por sonicação e centrifugação do
cultivo foi purificada por HPLC por troca iônica (coluna Q FF). A proteína purificada foi complexada
ao adjuvante hidróxido de alumínio para produção do imunógeno. A imunização em camundongos
(linhagem suíço) consistiu de três doses intraperitoneais (20ug da vacina em volume de 200uL, diluído
em PBS) com intervalo de sete dias entre cada inoculação, seguido de reforço intravenoso (20ug do
antígeno rPsaA solúvel em volume de 70uL diluído em PBS). Após o período de tratamento, os animais
foram anestesiados com éter etílico e eutanasiados imediatamente. Todas as análises subseqüentes
para caracterização dos anticorpos produzidos foram realizadas por immunoblotting, que consiste de
uma reação antígeno/anticorpo em membrana de nitrocelulose. Como controle positivo, foi utilizado
um soro hiperimune de coelho anti-PsaA. Os soros obtidos destes animais foram titulados para
determinação da concentração ideal dos anticorpos, incubando-os em diferentes diluições (1:200 até
1:20000). Definida a melhor diluição, pôde-se verificar a sensibilidade de detecção do anticorpo em
relação às concentrações de rPsaA (500ng/uL-1ng/uL). Em seguida foi avaliada a especificidade através
da reatividade cruzada a outros antígenos, como lisados das bactérias Staphylococcus aureus, Escherichia
coli e proteína recombinante LigBrep (rLigBrep) de Leptospira interrogans. Resultados: Foi confirmada
a especificidade dos anticorpos policlonais produzidos em camundongos contra rPsaA e o alto título
em torno de 1:15000 para os soros dos animais imunizados. Os anticorpos gerados demonstraram
elevada sensibilidade e avidez, reconhecendo a proteína em concentrações de até 5ng/uL. A avaliação
da especificidade destes anticorpos indicou capacidade de reconhecer a PsaA nativa de S. pneumoniae,
não apresentando reatividade cruzada quando expostos aos lisados celulares e a proteína rLigBrep.
conclusões: Os dados demonstram que a rPsaA é capaz de induzir altos títulos de anticorpos com
elevada sensibilidade e avidez, não apresentando reatividade cruzada para os demais antígenos testados.
Estes anticorpos reconheceram a proteína nativa, indicando seu potencial como reagente no projeto de
vacina pneumocócica recombinante em desenvolvimento em Biomanguinhos/Fiocruz.
Palavras-chave: Pneumonia; Streptococcus pneumoniae; PsaA; Tecnologia de DNA
Recombinante.
1 Aluno de Biomedicina do Centro Universitário Feevale
2 Docente do Curso de Biomedicina do Centro Universitário Feevale
3 Laboratório de Tecnologia Recombinante (BioManguinhos - Fundação Oswaldo Cruz)
II Congresso Internacional de Bioanálises
V Congresso Sul-Brasileiro & IX Semana Gaúcha de Biomedicina
Ano 2 | Volume 2 | Agosto de 2009
86