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ReAÇãO eM cADeIA DA POLIMeRASe PARA DeTecÇãO De
TORQUe TeNO VÍRUS
Joseane Vanessa dos Santos da Silva 1 , Andréia Dalla Vecchia2,
Lucas Kessler de Oliveira 2, Raquel Beiersdorf Frezza 3 , Juliana Comerlato 3 ,
Bianca Bergamaschi 3 , Manoela Tressoldi Rodrigues 3 , Gabriela Schalemberger 4 , Fernando Rosado Spilki 5 .
Introdução: Devido às limitações que os coliformes apresentam como indicadores de
contaminação fecal, a pesquisa no ramo da virologia aquática é crescente. Os vírus entéricos
possuem características que os tornam excelentes candidatos, sua estabilidade físico-química,
a possibilidade de identificar a origem da contaminação e sua resistência a etapas aplicadas
durante o tratamento de água. Recentemente, um dos vírus com excreção fecal que vem sendo
bastante estudado é o Torque teno vírus (TTV) devido a sua ampla disseminação na população
humana. O TTV é um vírus não-envelopado com diâmetro de 30-32 nm, composto por DNA
de fita simples, circular e com polaridade negativa. Objetivos: Este trabalho tem como objetivo
padronizar uma técnica para detecção de Torque teno vírus. Metodologia: Fazendo uso de
análises bioinformáticas, foram desenhados oligonucleotídeos com potencial alinhamento
em regiões altamente conservadas do genoma de TTV, os oligonucleotídeos resultantes foram
denominados Fw1 (5’ - GGG AGC TCA AGT CCT CAT TTG 3’), Fw2 (5’ GGG CCW GAA
GTC CTC ATT AG - 3’) e Rev (5’ GCG GCA TAA ACT CAG CCA TTC 3’), que amplificam
em torno de 100 pares de bases. Para a padronização da técnica foram utilizadas como controle
positivo amostras de DNA viral positiva, e como controle negativo células CRIB, a extração
de ácidos nucléicos virais foi realizada utilizando o reagente High Pure Viral Nucleic Acid
Kit (Roche). A reação de PCR foi realizada utilizando o solução comercial para amplificação
Supermix (Invitrogen), com 22,5 µL deste, 0,5 µL de Fw1, 0,5µL de Fw2, 0,5µL de Rev e 1µL
de DNA resultando em uma solução de 25 µL. Após a reação, o produto foi analisado por
eletroforese em gel de agarose a 2% e em tampão TBE, com brometo de etídeo e após visualizado
sob luz ultravioleta. Resultados: A técnica de PCR mostrou-se eficiente apresentando
amplicons no tamanho esperado. conclusões: Com aprimoramentos futuros esta metodologia
nos possibilitará a detecção de Torque teno vírus em amostras de água coletadas no ambiente,
contribuindo assim com as rotinas de monitoramento virológico da água.
Palavras-chave: Torque teno vírus; biologia molecular; amostras de água.
1 Aluna do curso de Enfermagem- Centro Universitário Feevale
2 Alunos do Mestrado em Qualidade Ambiental- Centro Universitário Feevale
3 Alunas do curso de Biomedicina- Centro Universitário Feevale
4 Aluna da Escola de Aplicação- Bolsista Júnior de Iniciação Científica
5 Docente do ICS e PPG em Qualidade Ambiental- Centro Universitário Feevale
II Congresso Internacional de Bioanálises
V Congresso Sul-Brasileiro & IX Semana Gaúcha de Biomedicina
Ano 2 | Volume 2 | Agosto de 2009
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