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VOLTAR AO SUMÁRIO<br />
EXTRAÇÃO DE DNA DE BULBO DE PENAS COM IODETO DE SÓDIO<br />
Ana Paula Muterle Varela 1 , Helton Fernandes dos Santos 1 , Samuel Paulo Cibulski 1 ,<br />
Thais Fumaco Teixeira 1 ,Diogenes Dezen 1 e Paulo Michel Roehe 1<br />
Introdução: A pena é um dos importantes veículos de transmissão de patógenos -<br />
especialmente vírus - entre <strong>as</strong> aves. A maioria desses agentes fica alojado no bulbo da pena,<br />
o qual é composto por tecidos epiteliais e célul<strong>as</strong> sanguíne<strong>as</strong>, sendo cobertos por espessa<br />
camada de queratinócitos secos, tornando-se um ambiente ideal para a preservação de alguns<br />
microorganismos. Por ser um material de fácil coleta e armazenamento, a pena tem se mostrado<br />
muito útil para diagnóstico de infecções de aves. Objetivo: reportar a padronização da técnica<br />
de extração de DNA, a partir de bulbos de pen<strong>as</strong>, utilizando iodeto de sódio (NaI). Metodologia:<br />
cinco bulbos de pen<strong>as</strong> (aproximadamente 3 cm de comprimento) foram macerados com N 2<br />
líquido e incubados por 16 hor<strong>as</strong> a 56 ºC com 1mL de solução de lise (5% SDS, 100mM Tris<br />
pH 8,0; 10mM EDTA; 1M NaCl e 5mg de Protein<strong>as</strong>e K). A seguir, 300µl dessa solução foram<br />
transferidos para novo tubo e adicionados 300µl de NaI 6M e 600µl de clorofórmio-álcool<br />
isoamílico (24:1), homogeneizado por 5 minutos e centrifugado a 5000 x g por 5 minutos. Do<br />
sobrenadante foram coletados 500µl, aos quais foram adicionados 500µl de clorofórmio-álcool<br />
isoamílico e esta suspensão novamente centrifugada. A precipitação do DNA foi realizada com<br />
400µl do sobrenadante, ao qual foram adicionados 1000µl de etanol absoluto gelado, seguindose<br />
uma incubação por 30 minutos a -20 ºC. Após, a mistura foi centrifugada por 20 minutos<br />
a 14000 x g. O sobrenadante foi removido e o DNA ressuspenso em 50µl de TE (pH 8,0) e<br />
tratado com 20µg/mL de RNAse a 37 ºC por 30 minutos. A quantificação do DNA foi realizada<br />
por eletroforese em gel de agarose a 1% utilizando o programa Kodak Digital Science 1D TM .<br />
conclusão: Através desta técnica, é possível obter em média 500ng de DNA por amostra com<br />
qualidade apropriada para a realização de técnic<strong>as</strong> moleculares de diagnóstico utilizando um<br />
reagente menos tóxico que fenol, o qual é comumente empregado em extrações de DNA. Com<br />
isso, geram-se resíduos menos agressivos ao meio ambiente e com custo reduzido em relação ao<br />
uso de fenol.<br />
Palavr<strong>as</strong>-chave: DNA; Iodeto de Sódio; Aves.<br />
1 Instituto de Pesquis<strong>as</strong> Veterinári<strong>as</strong> Desidério Finamor, Eldorado do Sul, RS; Programa de Pós-graduação em Ciênci<strong>as</strong><br />
Veterinári<strong>as</strong>, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS.<br />
II Congresso Internacional de Bioanálises<br />
V Congresso Sul-Br<strong>as</strong>ileiro & IX Semana Gaúcha de Biomedicina<br />
Ano 2 | Volume 2 | Agosto de 2009<br />
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