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PADRONIzAÇÃO DA TÉCNICA DE REAÇÃO EM CADEIA DA
POLIMERASE VISANDO DETECÇÃO DE DIFERENTES ENTEROVÍRUS
EM AMOSTRAS CLÍNICAS
Juliana Comerlato 1 , Joseane Vanessa dos Santos da Silva 2 , Raquel Beiersdorf Frezza 1 , Andréia Dalla Vecchia 3 ,
Lucas Kessler de Oliveira 3 , Bianca Bergamaschi 1 , Manoela Tressoldi Rodrigues 1 e Fernando Rosado Spilki 4
Introdução: Enterovírus são vírus causadores de doenças habituais como resfriados e
gastroenterites e até doenças mais graves como a poliomelite. Este gênero vem sendo relacionado
também como possível causador da diabete mellitus tipo 1. Enterovírus são dotados de um
genoma de cadeia única de RNA, não-envelopados com capsídeo icosaédrico. A classificação
é controversa, mas atualmente esses membros da família Picornaviridae são divididos em 10
espécies, classificadas como: Enterovírus bovino, Enterovírus de símios A, Enterovírus suínos
A e B, Rinovírus humano A e B e Enterovírus humano de A à D. Por suas características de
transmissão via fecal-oral, os enterovírus fazem parte de um grupo chamado de vírus entéricos,
encontrados com freqüência em águas contaminadas. Atualmente não são conhecidos valores
de prevalência deste vírus em amostras clínicas. Objetivo: Padronizar uma técnica de reação
em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de enterovírus em amostras clínicas, tanto
humanas como animais. Metodologia: Utilizou-se como controle positivo o Enterovírus bovino
(BEV), cultivado in vitro e quantificado por titulação em microplacas. Para extração de ácidos
nucléicos virais foi utilizado o kit comercial High Pure Viral Nucleic Acid Kit (Roche). O cDNA
foi transcrito a partir do RNA genômico viral e usado como molde para a amplificação por PCR.
A reação de PCR foi realizada utilizando o GoTaq Green Master Mix (Promega). Os iniciadores
utilizados foram desenhados com base em regiões altamente conservadas do fragmento 5’-NTR
do genoma de enterovírus, sendo denominados ENT-F1 (5’-CCTCGGCCCCTGAATG-3’) e
ENT-R2 (5’-ACACGGACACCCAAAGTA-3’). Após a reação, o produto foi analisado por
eletroforese em gel de agarose e em tampão TBE, com Blue Green Loading Dve I, e após
visualizado sob luz ultravioleta. Resultados: A reação padronizada obteve excelente sensibilidade
analítica, tendo o mínimo de uma partícula infecciosa como limiar de detecção. conclusão:
Com aprimoramentos futuros, tal metodologia poderá ser empregada na detecção de vírus em
amostras humanas ou animais para detecção de infecção por enterovírus.
Palavras-chave: PCR; enterovírus; detecção.
1 Alunos do Curso de Biomedicina - Centro Universitário Feevale;
2 Aluna do Curso de Enfermagem – Centro Universitário Feevale;
3 Alunos do Mestrado em Qualidade Ambiental - Centro Universitário Feevale;
4 Docente do Curso de Biologia - Centro Universitário Feevale.
II Congresso Internacional de Bioanálises
V Congresso Sul-Brasileiro & IX Semana Gaúcha de Biomedicina
Ano 2 | Volume 2 | Agosto de 2009
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