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VOLTAR AO SUMÁRIO DETECÇÃO DE DNA DE HERPESVÍRUS BOVINOS TIPO 1 E 5 EM AMOSTRAS DE SÊMEN DE TOUROS REPRODUTORES Martha Trindade Oliveira 1,2 , Fabrício Souza Campos 1,3 , Fabrício Dias Torres 1,3 , Wilia Marta Elser Diederichsen de Brito 1,3 , Franciscus Antonius Maria Rijsewijk 1,4 , Paulo Michel Roehe 1,5,6 , Ana Cláudia Franco 1,5 Introdução: Os herpesvírus bovinos tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5) são agentes que causam grande impacto na pecuária. Esses vírus estão associados principalmente a manifestações nos tratos respiratório e genital de bovinos, estando também relacionados a uma série de problemas reprodutivos nesses animais. As diversas manifestações clínicas dessas viroses podem levar a significantes perdas na esfera econômica para a bovinocultura, tornando importante o diagnósticos desses vírus. Objetivo: Avaliar a presença de BoHV-1 e 5 em amostras sêmen através da técnica denominada reação em cadeia da polimerase “nested” (nPCR). Metodologia: Este é um estudo experimental, no qual foram obtidas 54 amostras de sêmen in natura dos estados do Rio Grande do Sul e de Goiás e 23 amostras de sêmen em palheta de um centro de inseminação artificial. A extração de DNA pelo método de fenol foi precedida por uma encubação das amostras em solução de lise (SDS10%, proteínas K). A precipitação dos ácidos nucleicos foi realizada com isopropanol, sendo seguida de uma purificação dos contaminantes orgânicos com n-butanol. A nPCR foi desenhada tendo como alvo a região C-terminal do gene da glicoproteína C. Foi realizada uma primeira amplificação, usando um par de primers não específicos para os tipos virais. Após, foi realizada uma segunda reação tipo-específica, utilizando primers internos ao produto da primeira reação, o que resultou na produção de fragmentos de diferentes tamanhos para cada tipo de vírus. Controles negativos (reações sem amostra ou reações negativas para a presença de genoma de BoHV-1) foram adicionados a cada conjunto de quatro reações. Para identificar falso-negativos, um controle interno (uma sequência de tamanho diferente que amplifica com os mesmos primers) foi adicionado a cada reação. Resultados: Até o momento foram analisadas 34 amostras de sêmen in natura e 3 amostras de sêmen em palheta. O DNA viral foi detectado em 36 das 37 amostras (97%), sendo 32 positivas para ambos os vírus (88,8%) e 4 positivas apenas para BoHV-5 (11,1%). Não foi possível isolar vírus das amostras examinadas. conclusões: Os resultados indicam que seria recomendável que amostras de sêmen sejam examinadas rotineiramente para diminuir o risco de novas infecções e problemas potencialmente associados a BoHV-1 e 5. Palavras-chave: BoHV-1; BoHV-5; Nested PCR. 1 Equipe de Virologia UFRGS-IPVDF 2 Aluna do Programa de Pós-Graduação em Microbiologia Agrícola e Ambiental da Universidade Federal do Rio Grande Sul 3 Aluno do Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul 4 Pesquisador Visitante da Universidade Federal do Rio Grande do Sul 5 Professor Adjunto do Departamento de Microbiologia do Instituto de Ciências Básicas da Saúde da Universidade Federal do Rio Grande do Sul 6 Pesquisador do Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor II Congresso Internacional de Bioanálises V Congresso Sul-Brasileiro & IX Semana Gaúcha de Biomedicina Ano 2 | Volume 2 | Agosto de 2009 104
VOLTAR AO SUMÁRIO ESTUDO QUALITATIVO DA FLORA MICÓTICA ANEMÓFILA DA CIDADE DE BLUMENAU/SC Emerson dos Reis 1 , Jader D. Klug 1 , Fabiana Possamai 1 , Susane Lopes 1 , Jefferson Akyra I. Aragão 1 , Leônidas João de Mello Júnior 1 , Rafael Kremer 1 e Antonio Roberto R. Abatepaulo 1 Introdução: Fungos compõem a classe de microrganismos com grande capacidade de propagação no ar. O conhecimento em relação aos fungos anemófilos e a procura de novos indicadores de boas condições ambientais ocasionam o aumento do interesse em estudar e classificar, do ponto de vista microbiológico, os mais diversos ambientes. No intuito de realizar sua multiplicação, os fungos produzem estruturas que podem levar ao desenvolvimento de processos alérgicos e micoses, das quais, em sua maioria, surgem em caráter oportunista. Realizar o mapeamento microbiológico de pontos da cidade pode, não só contribuir para caracterização microbiológica local, como também permitir o desenvolvimento de medidas preventivas frente às patologias por esses microrganismos causadas. Objetivos: Qualificar, do ponto de vista microbiológico, os mais diversos ambientes localizados na cidade de Blumenau/ SC. Metodologia: Placas de Petri de 10cm de diâmetro contendo 10mL de Agar Batata (PDA) foram expostas por um período de 10 minutos nos seguintes ambientes: Área Industrial, Praças de Alimentação, Mata Fechada, Ambiente Hospitalar, Terminais de Ônibus e Estacionamentos. Após a coleta do material, as placas foram mantidas em estufa (30 o C) por um período de 5 dias. A análise microscópica das colônias obtidas deu-se através da técnica de microcultivo seguida da coloração por Azul de Lactofenol-Algodão. Resultados: Houve um crescimento diferenciado das espécies fúngicas quando comparado os tipos crescido em cada ambiente, tanto do ponto de vista qualitativo quanto a freqüência dos mesmos. Como destaque, 60% das espécies obtidas em Mata Fechada foram do gênero Fusarium sp, 60% das espécies obtidas nas Praças de Alimentação foram do gênero Curvularia sp. Os demais ambientes apresentaram uma incidência muito semelhante entre as espécies encontradas, sendo os Terminais de ônibus com maior diversidade de espécies. conclusão: Há uma grande discrepância entre os tipos de fungos nos ambientes estudados, evidenciando a interferência do ambiente no desenvolvimento da população microbiana local. Palavras-chaves: Fungos, Anemófilo, Ambientes, Blumenau. 1 Centro Universitário Leonardo da Vinci II Congresso Internacional de Bioanálises V Congresso Sul-Brasileiro & IX Semana Gaúcha de Biomedicina Ano 2 | Volume 2 | Agosto de 2009 105
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