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DETECÇÃO DE DNA DE HERPESVÍRUS BOVINOS TIPO 1 E 5 EM
AMOSTRAS DE SÊMEN DE TOUROS REPRODUTORES
Martha Trindade Oliveira 1,2 , Fabrício Souza Campos 1,3 , Fabrício Dias Torres 1,3 , Wilia Marta Elser Diederichsen de
Brito 1,3 , Franciscus Antonius Maria Rijsewijk 1,4 , Paulo Michel Roehe 1,5,6 , Ana Cláudia Franco 1,5
Introdução: Os herpesvírus bovinos tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5) são agentes que causam
grande impacto na pecuária. Esses vírus estão associados principalmente a manifestações nos
tratos respiratório e genital de bovinos, estando também relacionados a uma série de problemas
reprodutivos nesses animais. As diversas manifestações clínicas dessas viroses podem levar
a significantes perdas na esfera econômica para a bovinocultura, tornando importante o
diagnósticos desses vírus. Objetivo: Avaliar a presença de BoHV-1 e 5 em amostras sêmen
através da técnica denominada reação em cadeia da polimerase “nested” (nPCR). Metodologia:
Este é um estudo experimental, no qual foram obtidas 54 amostras de sêmen in natura dos
estados do Rio Grande do Sul e de Goiás e 23 amostras de sêmen em palheta de um centro
de inseminação artificial. A extração de DNA pelo método de fenol foi precedida por uma
encubação das amostras em solução de lise (SDS10%, proteínas K). A precipitação dos ácidos
nucleicos foi realizada com isopropanol, sendo seguida de uma purificação dos contaminantes
orgânicos com n-butanol. A nPCR foi desenhada tendo como alvo a região C-terminal do
gene da glicoproteína C. Foi realizada uma primeira amplificação, usando um par de primers
não específicos para os tipos virais. Após, foi realizada uma segunda reação tipo-específica,
utilizando primers internos ao produto da primeira reação, o que resultou na produção de
fragmentos de diferentes tamanhos para cada tipo de vírus. Controles negativos (reações sem
amostra ou reações negativas para a presença de genoma de BoHV-1) foram adicionados a cada
conjunto de quatro reações. Para identificar falso-negativos, um controle interno (uma sequência
de tamanho diferente que amplifica com os mesmos primers) foi adicionado a cada reação.
Resultados: Até o momento foram analisadas 34 amostras de sêmen in natura e 3 amostras de
sêmen em palheta. O DNA viral foi detectado em 36 das 37 amostras (97%), sendo 32 positivas
para ambos os vírus (88,8%) e 4 positivas apenas para BoHV-5 (11,1%). Não foi possível isolar
vírus das amostras examinadas. conclusões: Os resultados indicam que seria recomendável que
amostras de sêmen sejam examinadas rotineiramente para diminuir o risco de novas infecções
e problemas potencialmente associados a BoHV-1 e 5.
Palavras-chave: BoHV-1; BoHV-5; Nested PCR.
1 Equipe de Virologia UFRGS-IPVDF
2 Aluna do Programa de Pós-Graduação em Microbiologia Agrícola e Ambiental da Universidade Federal do Rio Grande Sul
3 Aluno do Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul
4 Pesquisador Visitante da Universidade Federal do Rio Grande do Sul
5 Professor Adjunto do Departamento de Microbiologia do Instituto de Ciências Básicas da Saúde da Universidade Federal do
Rio Grande do Sul
6 Pesquisador do Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor
II Congresso Internacional de Bioanálises
V Congresso Sul-Brasileiro & IX Semana Gaúcha de Biomedicina
Ano 2 | Volume 2 | Agosto de 2009
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