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Material e Método Juvenis de pintado adquiridos do Projeto Pacu (Campo Grande, MS), que foram aclimatados às condições experimentais por cerca de dois meses (outubro-novembro de 2006), em fotoperíodo natural (14L:12E), no Biotério do Departamento de Fisiologia Animal da UNESP Jaboticabal, onde permaneceram até o experimento, recebendo ração comercial (40% de proteína bruta) uma vez ao dia entre as 18:30 e 19 horas. Os animais foram considerados aclimatados quando começaram a se alimentar regularmente. Um total de 144 peixes (17,2 ± 5,3 g e 15,7 ± 1,4 cm) foi distribuído aleatoriamente em 36 caixas pretas de polietileno de 60 L (4 animais por caixa), cobertas com sombrite, com sistema de renovação de água e aeração constantes. A temperatura média da água das caixas foi 28,4 ± 0,82 °C e a concentração de oxigênio dissolvido 6,72 ± 0,26 mg/mL. O local não era totalmente isolado de movimentação. Os peixes não foram alimentados por 24 horas antes do experimento. A coleta de material biológico foi realizada com intervalo de duas em duas horas, por 24 horas, sendo amostrados quatro peixes de três caixas por coleta (n=12). Os animais foram anestesiados com benzocaína (50mg/L). Amostragem e métodos de análise Os animais amostrados tiveram o sangue coletado por punção do vaso caudal. Uma alíquota foi colocada em microtubos com 15µL de EDTA e fluoreto de potássio, centrifugada para separação de plasma (a 3000 rpm por 10 min a 4ºC) e imediatamente a glicose foi determinada (Kit Labtest). O restante do sangue foi colocado em outros microtubos e permaneceram em repouso por duas horas para separação de soro por centrifugação (3000 rpm por 10 min, a 4ºC). O soro resultante foi congelado para posterior análise de cortisol (Radioimunoensaio – kit DPC). Após coleta do material biológico, os animais foram pesados e medidos, antes de retornarem as caixas para recuperação. 46
Delineamento experimental e análise estatística O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Os resultados obtidos foram analisados por ANOVA. As médias foram comparadas pelo teste de Duncan, com nível de significância de 5%. 47
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