incidência, distribuição e disseminação do csvmv dentro do ...
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INCIDÊNCIA, DISTRIBUIÇÃO E DISSEMINAÇÃO DO CSVMV<br />
DENTRO DO GERMOPLASMA DE MANDIOCA DO SEMI-ÁRIDO 1<br />
Karinna Vieira Chiacchio Velame 2 ; Adriana Fiuzza 3 Cleidiane Borges Daltro 4 ;<br />
Alfre<strong>do</strong> Augusto Cunha Alves 5 ; Eduar<strong>do</strong> Chumbinho de Andrade 6<br />
Resumo - A mandioca (Manihot esculenta Crantz) é uma das principais fontes de<br />
energia na dieta das populações de países tropicais. Ela é propagada de maneira<br />
vegetativa, utilizan<strong>do</strong>-se para o plantio pequenos segmentos <strong>do</strong> caule (manivas),<br />
prática que facilita a <strong>disseminação</strong> das viroses. Na região semi-árida <strong>do</strong> Brasil há a<br />
prevalência <strong>do</strong> vírus <strong>do</strong> mosaico das nervuras, CSVMV. Objetivan<strong>do</strong> avaliar o grau<br />
de <strong>incidência</strong>, <strong>distribuição</strong>, e também a <strong>disseminação</strong> <strong>do</strong> vírus no BAG <strong>do</strong> CPATSA,<br />
foram feitas avaliações <strong>do</strong>s acessos nos anos de 2007-09. No ano de 2007, foram<br />
detecta<strong>do</strong>s 24,8% de plantas contaminadas, valor que cresceu cerca de 20% nas<br />
avaliações seguintes, e estes novos acessos contamina<strong>do</strong>s próximos aos que já se<br />
apresentavam contamina<strong>do</strong>s anteriormente. Estes da<strong>do</strong>s sugerem que a<br />
<strong>disseminação</strong> <strong>do</strong> vírus está ocorren<strong>do</strong> por meio de instrumentos de corte.<br />
Palavras-chave: mandioca, vírus, mosaico das nervuras, <strong>disseminação</strong><br />
Introdução<br />
A Nigéria e Brasil são os maiores produtores de mandioca, com 38 e 27<br />
milhões de toneladas produzidas em 2005 (FAO, 2006). Cultivada em todas as<br />
regiões brasileiras, a mandioca é utilizada para a produção de farinha, extração de<br />
ami<strong>do</strong> e para o consumo in natura.<br />
Ela é propagada de maneira vegetativa, utilizan<strong>do</strong>-se para o plantio pequenos<br />
segmentos <strong>do</strong> caule (manivas). Essa forma de plantio tem a vantagem de se utilizar<br />
a própria planta colhida como material propagativo para o plantio seguinte, não<br />
geran<strong>do</strong> custos ao produtor, porém, facilita a <strong>disseminação</strong> das viroses.<br />
A utilização de manivas infectadas, leva a uma diminuição contínua no<br />
desempenho da planta a cada ciclo, além de possibilitar a introdução e/ou<br />
<strong>disseminação</strong> de viroses entre/<strong>dentro</strong> de regiões produtoras. No Nordeste brasileiro,<br />
principalmente na região semi-árida, se encontra distribuí<strong>do</strong> o vírus <strong>do</strong> mosaico das<br />
nervuras (Cassava vein mosaic virus, CsVMV), espécie de vírus <strong>do</strong> gênero<br />
Cavemovirus (Caulimoviridae), com genoma de DNA de fita dupla circular e partícula<br />
esférica (Calvert et al.,.ano?) Além da transmissão por material propagativo, o<br />
CsVMV é transmiti<strong>do</strong> por ferramentas utilizadas para o corte das manivas. Em<br />
relação ao continente americano, o CsCMV é o vírus que acarreta maiores perdas à<br />
cultura da mandioca, devi<strong>do</strong> à sua ampla <strong>disseminação</strong> no mesmo (CIAT, 1992).<br />
Observações de campo indicam que a manifestação severa da <strong>do</strong>ença em<br />
variedades suscetíveis pode causar perdas de produção que variam de 10 a 20%,<br />
prejudican<strong>do</strong> a qualidade <strong>do</strong> produto, devi<strong>do</strong> à redução de 10 a 50% nos teores de<br />
1<br />
Projeto: Otimização de méto<strong>do</strong>s de inoculação e diagnóstico para viroses de mandioca<br />
2<br />
Bolsista de apoio técnico da FAPESB;<br />
3<br />
Estudante <strong>do</strong> Curso de Agronomia da Universidade Federal <strong>do</strong> Recôncavo da Bahia;<br />
4<br />
Estudante <strong>do</strong> Curso de Ciências Biológicas da Universidade Federal <strong>do</strong> Recôncavo da Bahia;<br />
5<br />
Pesquisa<strong>do</strong>r da Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical; E-mail: aalves@cnpmf.embrapa.br.<br />
6<br />
Pesquisa<strong>do</strong>r da Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical; E-mail: eandrade@cnpmf.embrapa.br.
ami<strong>do</strong> (Fukuda, 1993). Este trabalho teve como objetivo avaliar a <strong>incidência</strong>,<br />
<strong>disseminação</strong> e variabilidade genética <strong>do</strong> CsVMV no banco ativo de germoplasma<br />
(BAG) de mandioca manti<strong>do</strong> na Embrapa semi-ári<strong>do</strong> (CPATSA).<br />
Meto<strong>do</strong>logia<br />
As amostras foliares foram coletadas de to<strong>do</strong>s os acessos <strong>do</strong> BAG <strong>do</strong><br />
CPATSA, totalizan<strong>do</strong> 375 acessos, no ano de 2007. Nos anos de 2008 e 2009,<br />
foram coletadas amostras foliares <strong>do</strong>s acessos que se apresentavam sadios na<br />
avaliação <strong>do</strong> ano anterior.<br />
O DNA total foi extraí<strong>do</strong> pelo méto<strong>do</strong> descrito por Dellaporta et al. (1983)<br />
modifica<strong>do</strong>, que consiste em macerar a amostra foliar em 500 µL de tampão de<br />
extração (100 mM de Tris-HCl pH 8.0, 500 mM de NaCl, 50 mM de EDTA e 10 mM<br />
de β-mercaptoetanol), segui<strong>do</strong> pela adição de 33 µL de SDS 20% e aquecimento por<br />
10 minutos. Em seguida faz-se uma extração com 1 volume (V) clorofórmio,<br />
precipita-se o DNA com a adição de 0,7 V de isopropanol e em seguida é lava<strong>do</strong><br />
com etanol 70%, seco e ressuspendi<strong>do</strong> em água. O DNA total é utiliza<strong>do</strong> com molde<br />
para as reações de PCR.<br />
Os oligonucleotídeos utiliza<strong>do</strong>s para a detecção são os descritos por Calvert<br />
(1995), que possibilitam a amplificação de um fragmento de 750pb.<br />
Na reação de PCR, foram utiliza<strong>do</strong>s 5µL <strong>do</strong> DNA total, 5 µL <strong>do</strong> tampão da<br />
PCR 10X (200mM Tris-HCl, pH 8.4, 500mM KCl), 3µL de MgCl2 25mM, 1 µL <strong>do</strong>s<br />
dNTPs (2,5mM), 0,5µM de cada oligonucleotídeo, 0,2µL (5u/µL) da Taq DNA<br />
polimerase, e o volume completa<strong>do</strong> para 50 µL com água ultra-pura. Os produtos da<br />
PCR foram analisa<strong>do</strong>s por eletroforese em gel de agarose 1,0%.<br />
Resulta<strong>do</strong>s e Discussão<br />
Os acessos <strong>do</strong> BAG são replanta<strong>do</strong>s a cada ano, utilizan<strong>do</strong>-se manivas<br />
retiradas com o uso de facões ou serrotes, prática que possibilita a transmissão <strong>do</strong><br />
CsVMV entre os acessos. Em 2007 foi iniciada a avaliação da <strong>incidência</strong> e<br />
<strong>distribuição</strong> de acessos com o CsVMV e nos anos de 2008 e 2009 se manteve o<br />
acompanhamento <strong>do</strong>s 375 acessos <strong>do</strong> BAG, quanto à <strong>disseminação</strong> e <strong>distribuição</strong><br />
<strong>do</strong> CsVMV, após cada renovação <strong>do</strong> BAG.<br />
Na primeira avaliação, em 2007, foi constatada a presença de 92 acessos<br />
contamina<strong>do</strong>s (Figura 1), distribuí<strong>do</strong>s prevalentemente de forma agrupada <strong>dentro</strong><br />
das linhas de plantio (Figura 2). Avaliações realizadas em 2008 constataram um<br />
aumento de 16,3% no número de acessos infecta<strong>do</strong>s em relação a 2007, e numa<br />
nova avaliação realizada em 2009 constatou-se um incremento de 41% em relação<br />
a 2008, atingin<strong>do</strong> um total de 151 acessos contamina<strong>do</strong>s (Figura 1). Os acessos que<br />
se tornaram contamina<strong>do</strong>s em 2008 e 2009 estão posiciona<strong>do</strong>s próximos ou mesmo<br />
adjacentes aos que já estavam contamina<strong>do</strong>s em 2007 (Figura 2).<br />
A <strong>distribuição</strong> <strong>do</strong>s acessos infecta<strong>do</strong>s no BAG <strong>do</strong> CPATSA mostra que a<br />
grande maioria <strong>do</strong>s acessos contamina<strong>do</strong>s ou estão agrupa<strong>do</strong>s ou próximos uns <strong>do</strong>s<br />
outros. Como exemplos: <strong>do</strong> acesso 40 ao 51 existem 11 acessos, <strong>do</strong>s quais 7 estão<br />
contamina<strong>do</strong>s e <strong>do</strong> 269 ao 281 existem 12 acessos, <strong>do</strong>s quais 8 estão<br />
contamina<strong>do</strong>s. Esta <strong>distribuição</strong>, aliada a da<strong>do</strong>s da literatura que indicam a ausência<br />
de um inseto vetor para o CsVMV, mostra que a <strong>disseminação</strong> <strong>do</strong> vírus no BAG<br />
provavelmente está sen<strong>do</strong> realizada por meio de ferramentas de corte, quan<strong>do</strong> é<br />
feita a retirada de manivas para novos plantios. É provável que tenha si<strong>do</strong><br />
introduzi<strong>do</strong> no BAG material propagativo contamina<strong>do</strong>, e a cada renovação <strong>do</strong> BAG,
na qual se utilizam ferramentas de corte (facão e serrote) sem os devi<strong>do</strong>s cuida<strong>do</strong>s<br />
de desinfestação, foi-se transmitin<strong>do</strong> o vírus para os acessos vizinhos.<br />
n° plantas infectadas<br />
160<br />
150<br />
140<br />
130<br />
120<br />
110<br />
100<br />
90<br />
80<br />
70<br />
60<br />
50<br />
40<br />
30<br />
20<br />
10<br />
0<br />
92<br />
2007 2008 2009<br />
Figura 1: Incidência <strong>do</strong> CsVMV no banco de germoplasma de mandioca <strong>do</strong> CPATSA<br />
em cada ano avalia<strong>do</strong>.<br />
Conclusões<br />
Os da<strong>do</strong>s de <strong>distribuição</strong> <strong>do</strong>s acessos infecta<strong>do</strong>s no campo sugerem que a<br />
<strong>disseminação</strong> <strong>do</strong>s vírus <strong>dentro</strong> <strong>do</strong> BAG está ocorren<strong>do</strong> por meio <strong>do</strong> uso de<br />
ferramentas de corte, durante o processo de renovação <strong>do</strong> mesmo.<br />
107<br />
151
Figura1: Distribuição <strong>do</strong>s acessos infecta<strong>do</strong>s no BAG <strong>do</strong> CPATSA.
Agradecimentos<br />
À Fapesb, pela bolsa de Apoio Técnico.<br />
Referências<br />
CALVERT, L., OSPINA, M.D., SHEPERD, R.J. Characterization of cassava vein<br />
mosaic virus: a distinct plant pareretrovirus. Journal of General Virology, v. 76(5),<br />
p. 1271-1276, 1995.<br />
CIAT. Cassava Program 1992. Cali, 292 p. (CIAT working Document, 142).<br />
DELLAPORTA, S. L.; WOOD, J.; HICKS, J. B. A plant DNA minipreparation: Version<br />
II. Plant Mol. Biol. Rep., v.1, n. 4, p.19-21, 1983.<br />
FAO, 2006. http://faostat.fao.org/site/408/DesktopDefault.aspx?PageID=408.<br />
Acessa<strong>do</strong> em 02/05/2006<br />
FUKUDA , C. Doenças da mandioca. In: EMBRAPA. Centro Nacional de Mandioca e<br />
Fruticultura (Cruz das Almas, BA), Instruções práticas para o cultivo de mandioca.<br />
Cruz das Almas, 1993,p.53-56.