Anemia infecciosa das galinhas: as inoculações ... - Mercolab

Anemia infecciosa das
galinhas: as inoculações
experimentais
Iara Maria Trevisol
Pesquisadora da Embrapa Suínos e Aves
iara@cnpsa.embrapa.br

CAV no laboratório
• Histórico
• aves de postura comercial ,
• 12 semanas,
• crista caída, barbela flácida; alguns casos barbela torna-
se necrosada (primeiros casos -2007),
• hemorragias na ponta das asas e no músculo peitoral,
• aplasia de medula óssea,
•lesões: no fígado e ovários semelhante a salmonelose,
•Isolamento: positivo somente para Stafilococcus.

• Suspeita clínica
CAV no laboratório
• infecção pelo vírus da Anemia Infecciosa das
Galinhas com sinais clínicos,
• em aves adultas(???)

Materiais:
CAV no laboratório
•CAV BR 40: fêmur, baço, fígados
•CAV BR 41: fêmur, baço, fígados

Inoculação via falsa
câmara
CAV no laboratório
Teste Objetivo Observações
RT-PCR diretamente do
macerado de tecidos.
PCR diretamente do
macerado de tecidos.
Encontrar lesões
sugestivas da presença de
Vírus da Doença de
Gumboro para descartar
associação de agentes
imunossupressores.
Detecção de DNA viral –
dirigida para seqüência do
VDG.
Detecção de DNA viral –
dirigida para seqüência do
CAV.
3 passagens de 7 dias
de incubação.
Utilizada amostra
Lukert como referência
positiva.
Utilizada amostra Cux1
como referência
positiva.
Resultados
CAV40 CAV41
Negativo Positivo
Negativo Positivo
Positivo Negativo

Sequenciamento
CAV no laboratório
Teste Objetivo Observações
Inoculação 1 a partir dos
sobrenadantes dos tecidos
macerados.
PCR a partir do cultivo
celular em MSB1
Inoculação experimental
em aves adultas e
pintinhos SPF
Analisar homologia com
amostra de referência Cux-
1, amostras vacinais e
amostra de campo.
Encontrar ECP sugestivos
da presença do CAV.
Confirmar replicação do
vírus do CAV em células.
Reproduzir a doença.
Utilizada amostra de
campo denominada
15/90.
Foram realizadas 7
passagens com intervalo
de 48 a 72 horas entre
elas.
Utilizada amostra Cux1
como referência positiva.
Utilizada amostra Cux1
como referência positiva
e p6 das amostras.
Conforme planos de
trabalho.
Resultados
CAV40 CAV41
*
Positivo
Não
realizado
Negativo
Positivo Negativo
*
Não
realizado

CAV no laboratório
• O vírus pode ser isolado da maioria dos órgãos
das aves doentes,
– preferencialmente de timo, baço, fígado e fezes:
• in vitro: em células de linhagem MSB-1
• in vivo: em pintos SPF de 1 dia de idade .

CAV: no laboratório
• Amostra para os ensaios de laboratório
•porções de baços e fígados.
• Inoculação em células MSB 1
• 7 passagens com intervalo de 48 a 72 horas
entre elas.

Inoculação em células MSB1
células não inoculadas
48 hs pi (obj.5x)
48 hs pi (obj. 40x)
células inoculadas com amostra Cux-1
48 hs pi (obj.5x)
48 hs pi (obj. 40x)

Inoculação em células MSB1
células não inoculadas
células inoculadas com amostra CAV40
48 hs pi (obj.5x) 48 hs pi (obj.5x)
48 hs pi (obj. 40x)
48 hs pi (obj. 20x)

• Reproduzir a doença
CAV: no laboratório
• a partir de porções de baços e fígados
• infectar pintos SPF de 1 dia
• exame clínico e colheita de material
14dpi

CAV: no laboratório
Grupo 1: aves não inoculadas
ave músculo timo fígado baço bursa fêmur pró-ventrículo
1 hemorragia
peito e coxa (?) s/a s/a s/a s/a s/a s/a
2 s/a s/a hemorragia s/a s/a s/a s/a
3 s/a menor 1 ponto
hemorrágico
s/a s/a s/a s/a
4 s/a s/a s/a s/a s/a s/a s/a
5 s/a s/a s/a s/a s/a s/a s/a
6 s/a s/a s/a s/a s/a s/a s/a

CAV: no laboratório
Grupo 2: aves inoculadas com amostra CAV40
ave músculo timo fígado baço bursa fêmur pró-ventrículo
1 hemorragia
peitoral unilateral
atrofia,
hemorragia
s/a atrofia atrofia aplasia leve de
MO
pontos
hemorragia
2 s/a atrofia, s/a atrofia, atrofia aplasia de MO úlceras,
hemorragia
palidez
erosão?
3 s/a atrofia ictérico, atrofia menor, aplasia de MO s/a
edemaciado
atrofia?
4 hemorragia atrofia, ictérico atrofia atrofia aplasia de MO s/a
peitoral unilateral congestão
5 s/a atrofia,
congestão
6 s/a atrofia,
congestão
7 hemorragia atrofia,
peitoral unilateral congestão
ictérico hipertrofia, atrofia aplasia leve de
MO
s/a atrofia atrofia aplasia leve de
MO
s/a atrofia atrofia aplasia leve de
MO
erosão
s/a
s/a

CAV: no laboratório
Avaliação das lesões macroscópicas grupo 2:

CAV: no laboratório
Valores de anticorpos – Elisa Idexx – 1:10
G1= 6 amostras negativas.
G1= 6 amostras negativas.
G2= 06 amostras positivas; 01 amostra imprópria.

CAV: no laboratório
Valores de hematócrito para grupo 2

Grupo controle negativo = aves não inoculadas
Grupo 2 = aves inoculadas com amostra CAV40

MUITO OBRIGADA!
EQUIPE EMBRAPA