tese silvia carvalho - Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães - Fiocruz

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Sílvia Maria Santos Carvalho
Caracterização da transmissão da leishmaniose tegumentar americana no município de Ilhéus, Zona da Mata do Estado da Bahia
2.7.2 PCR específica para o subgênero Viannia
A mistura básica de reação foi constituída de 4µL de tampão de PCR (10X) +
MgCl2 (25 mM); 2,5µ da solução de dNTPs (2mM cada); 5µL do par de primers (10
pmoles/µL – B1 e B2, subgênero Viannia); 0,5µL de Taq polimerase (5 U/mL); e
água q.s.p. 23 µL. A essa mistura foram adicionados 2µL da amostra a ser
analisada, totalizando 25 µL.
O material foi submetido às seguintes etapas de amplificação: um ciclo de
desnaturação a 94 o C por 5 min, seguido por 35 ciclos (94 o C por 30 seg., 65 o C por 1
min. e 72 o C por 1 min). Os amplicons foram visualizados em gel de agarose 1% e
corados com brometo de etídio (SAMBROOK; FRITSCH; MANIATS, 1989).
2.8 Análise estatística dos resultados
As variáveis estudadas foram: sexo, faixa etária, tempo de residência, teste
diagnóstico e passagem pela área rural daqueles residentes em área urbana. Foi
realizada uma análise descritiva dos resultados obtidos. A apresentação das
variáveis mensuradas foi feita através de tabelas ou gráficos, incluindo também o
uso de algumas medidas descritivas como mínimo, máximo, média e desvio padrão.
A análise comparativa das variáveis qualitativas foi realizada através do teste de
Qui-quadrado ou exato de Fisher. Todas as conclusões foram tomadas em nível de
significância de 5%.
2.9 Considerações éticas
Para as capturas dos insetos em domicílio, os responsáveis pelas
residências, desde que maiores de idade, assinaram o Termo de Consentimento
Livre e Esclarecido (TCLE), bem como os maiores de idade foram submetidos à
avaliação epidemiológica (Apêndices A, D e E); da mesma forma, concordaram em