Caroline Valente dissertação de mestrado - Universidade Federal ...

alterações de temperatura. Para uma melhor compreensão deste fato seriam
importantes análises mais detalhadas da relação entre o número de células, de
mitocôndrias e da alteração da expressão da PUMP.
A oxidase alternativa (AOX) foi caracterizada em mitocôndrias de A.
angustifolia através de comparação da respiração via citocromos com a respiração
resistente ao cianeto, mas sensível ao SHAM. Esta, mostrou-se ativa na oxidação de
substratos de complexos enzimáticos, como dos complexos I e II, e da NADH
desidrogenase externa. Para a complementação desta análise torna-se importante a
identificação da expressão gênica da AOX em variadas condições ambientais.
O aumento da atividade das NAD(P)H desidrogenases alternativas também
tem sido considerado como uma resposta ao estresse (M∅LLER, 2001). No
presente trabalho, a avaliação da atividade das NADH desidrogenases em A
angustifolia foi feita através da adição de flavona a mitocôndrias respirando pela
oxidação de NADH, succinato e malato/glutamato (+rotenona). Vários autores
atribuíram à flavona efeitos sobre a respiração mitocondrial. A este flavonóide tem
sido atribuídas inibição de estado 3, desacoplamento, e inibição de NADH
desidrogenases (RAVANEL et al., 1981; RAVANEL, 1986; HODNICK et al., 1987;
TUDELLA et al., 2003; UYEMURA et al., 2004; JUÁREZ et al., 2004). Os resultados
mostraram uma expressiva inibição das NADH desidrogenases alternativas pela
adição da flavona na presença de FCCP. O efeito foi menor na respiração de
repouso, estado 4, (dados não mostrados), porém nessa condição houve uma queda
do potencial elétrico de membrana, sugerindo ser decorrente da inibição das
enzimas. O efeito inibitório foi confirmado pela análise dos complexos enzimáticos
NADH desidrogenase e NADH-citocromo c redutase em mitocôndrias rompidas. Na
seqüência destes estudos é importante avaliar se os efeitos da flavona poderiam
estar relacionados com estresse conseqüente a formação de EROS, visto que
alguns flavonóides são considerados antioxidantes (MARTENS & MITHÖFER,
2005).
Finalmente, a determinação da expressão da PUMP, assim como das
atividades da AOX e NADH desidrogenases alternativas em A angustifolia, nos
estudos desenvolvidos por este grupo de pesquisa, servirá como referência para
experimentos futuros nesta e em outras gimnospermas.