Caroline Valente dissertação de mestrado - Universidade Federal ...

5.8 ATIVIDADE DA PUMP EM MITOCÔNDRIAS ISOLADAS DE A. angustifolia
As espécies reativas de oxigênio (EROS) podem causar danos oxidativos em
diversas biomoléculas e organelas celulares, como a mitocôndria, a qual é
particularmente sensível a esse dano devido ao fato de a cadeia respiratória estar
continuamente gerando EROS (KOWALTOWSKI et al., 1998). A presença da PUMP
pode diminuir EROS minimizando estes danos (KOWALTOWSKI et al., 1998;
VERCESI et al., 2006).
A proteína desacopladora de mitocôndrias de plantas é ativada por ácidos
graxos livres e inibida por nucleotídeos derivados de guanina ou adenina como o
ATP, ADP, GTP e GDP. Estes últimos se ligam à PUMP com alta afinidade,
reacoplando a respiração à fosforilação. O BSA também inibe a atividade da PUMP,
e o conseqüente desacoplamento mitocondrial, pois se liga aos ácidos graxos livres
responsáveis pela ativação da PUMP. Assim o desacoplamento depende da
presença simultânea de PUMP e de ácidos graxos livres (VERCESI et al., 2006).
Dessa forma para determinar a atividade da PUMP, as mitocôndrias de A.
angustifolia foram isoladas em meio de extração, isolamento e reação com e sem
BSA essencialmente desprovido de ácidos graxos, segundo o esquema abaixo:
Meio c/BSA
Isolamento das
mitocôndrias c/BSA
Meio s/BSA
Mitocôndrias de araucária
Isolamento das
mitocôndrias s/BSA
Meio c/BSA
Meio s/BSA